15364.洋甘菊快速繁殖及fps基因在煙草中的轉化研究

1、I摘要洋甘菊(MatricariachamomillaL.)又稱母菊，為菊科母菊屬一年生的草本植物，含揮發(fā)性芳香油。洋甘菊不僅具有抑菌、消炎的作用，還具有解痙鎮(zhèn)靜、止痛等諸多作用，是一種開發(fā)潛力極大的芳香性植物和藥用植物。母菊薁是洋甘菊揮發(fā)油的重要成分之一，為倍半萜類物質。母菊薁生物合成途徑屬于類異戊二烯代謝途徑，其中法呢基焦磷酸合酶（FPS）為這個代謝途徑的限速酶。本實驗一方面通過植物組織培養(yǎng)技術建立洋甘菊快速繁殖體系；另一方面通過克

2、隆法呢基焦磷酸合酶基因，構建FPS基因真核表達載體，并在煙草中進行表達檢測。為洋甘菊遺傳轉化體系建立和優(yōu)良品種的選育提供理論依據(jù)。實驗結果如下：1.建立了一套高效快速的洋甘菊離體再生體系。本文以洋甘菊種子為外植體，獲得無菌苗。并以無菌苗的葉柄為外植體，分別研究了單一植物激素和不同植物激素濃度及其組合對洋甘菊愈傷組織、不定芽、不定根誘導的影響，篩選出適合洋甘菊組織培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基。結果表明：在研究范圍內，洋甘菊愈傷組織誘導的最佳激素組合為

3、MS6BA2.0mgLNAA0.3mgL，愈傷組織的誘導率為91.6%；洋甘菊不定芽誘導的最佳激素組合為MS6BA1.0mgLNAA2.0mgL，不定芽的誘導率為79.4%；不定根分化的最佳培養(yǎng)基為MS6BA0.3mgLNAA0.5mgL，根的誘導率可達100%；試管苗移栽的最適基質為蛭石:珍珠巖:草炭(1∶1∶1)。2.構建了洋甘菊法呢基焦磷酸合酶基因真核表達載體。根據(jù)洋甘菊法呢基焦磷酸合酶mRNA全長序列，設計出特異性引物，以西德洋

4、甘菊花序總RNA為模板，利用特異性引物成功克隆出洋甘菊FPS基因，并將該片斷連接至克隆載體pEASYT4ZeroCloningVect上，轉化到Trans1T1感受態(tài)細胞中進行培養(yǎng)及基因測序。測序結果表明，通過RTPCR法獲得的FPS基因的開放閱讀框為1032bp，共編碼343個氨基酸殘基。將得到的洋甘菊FPS基因克隆至真核表達載體pBI121，成功地構建了植物表達載體pBI121FPS。3.研究了洋甘菊FPS基因在煙草中的轉化表達。采