南瓜韌皮部特異啟動(dòng)子dENP在轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中的表達(dá)特征.pdf

1、馬鈴薯是世界上僅次于水稻、小麥、玉米的第四大糧食作物，也是我國的第四大糧食作物。馬鈴薯既是重要的糧食作物，又是大宗蔬菜作物，還廣泛用于食品深加工和淀粉、酒精等工業(yè)加工用途。因此，馬鈴薯在我國工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。然而，馬鈴薯病蟲害嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)，其中最主要的病害是由蚜蟲引起的病毒病，其不僅直接吸食馬鈴薯葉片汁液，也傳播病毒引起馬鈴薯病毒病的流行。當(dāng)前，利用基因工程技術(shù)把一些外源的抗蟲、抗病、抗逆等基因的表達(dá)框架導(dǎo)入到植物中，獲

2、得了很大的成功。但轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的表達(dá)框架的啟動(dòng)子主要是組成型表達(dá)啟動(dòng)子，如CaMV35S，Ubiquitin等，這些啟動(dòng)子使得外源基因在植物體各個(gè)部位表達(dá)，不能集中在某些昆蟲危害的組織器官，使一些昆蟲不取食的組織器官也得到表達(dá)，造成了外源蛋白利用的不經(jīng)濟(jì)，加重了植物的負(fù)擔(dān)，也給轉(zhuǎn)基因安全帶來較大的壓力。本試驗(yàn)利用已經(jīng)克隆構(gòu)建的增強(qiáng)型南瓜韌皮部特異啟動(dòng)子dENP驅(qū)動(dòng)GUS基因，在pBI121的基礎(chǔ)上構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBdENP，

3、同時(shí)利用含有CaMV35S啟動(dòng)子和GUS嵌合基因的pBI121植物表達(dá)載體作為對(duì)照，二者同時(shí)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化馬鈴薯。通過抗性篩選、再生芽伸長、生根等組織培養(yǎng)，獲得100多棵抗性轉(zhuǎn)基因再生植株。通過PCR初步鑒定，大約有60％為陽性；對(duì)這些PCR陽性植株進(jìn)行Southernblot驗(yàn)證，確定外源基因的插入位點(diǎn)和拷貝數(shù)。最后對(duì)7個(gè)獨(dú)立轉(zhuǎn)化體進(jìn)行GUS的組織化學(xué)染色定性檢測(cè)和GUS酶活性的定量測(cè)定；結(jié)果表明dENP啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GUS在