20424.caevtaqmanpcr檢測及重組su蛋白的真核表達(dá)

1、CAEVTaqManPCR檢測及檢測及重組重組SU蛋白的蛋白的真核表達(dá)真核表達(dá)TaqManPCRfDetectionofCaprineArthritisEncephalitisVirus&EukaryoticexpressionofrecombinantSU學(xué)科專業(yè)：食品科學(xué)研究生：李霞指導(dǎo)教師：黃金海副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一二年十二月中文摘要中文摘要山羊關(guān)節(jié)炎—腦炎（CAE）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒（CAEV）引

2、起的山羊的慢性傳染病，CAEV可引起潛伏感染并呈世界性分布，妨礙了世界養(yǎng)羊業(yè)的正常貿(mào)易，導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過對(duì)CAEV89GB1026株全基因序列的分析，應(yīng)用TaqManPCR擴(kuò)增技術(shù)，建立了CAEV快速、靈敏、特異的檢測方法；同時(shí)通過重疊PCR和PCR擴(kuò)增CAEV的外膜蛋白（SU）基因，構(gòu)建了外膜蛋白SU的真核表達(dá)載體并進(jìn)行了真核表達(dá)。在CA蛋白基因的高保守區(qū)分別設(shè)計(jì)了特異性的引物和探針，應(yīng)用TaqManPCR擴(kuò)增技術(shù)，采用

3、ABIPrism7900HT熒光定量PCR儀，建立了pGEMTCA1質(zhì)?？截悢?shù)與Ct值得標(biāo)準(zhǔn)曲線，TaqManPCR可在1h內(nèi)檢測102個(gè)拷貝的質(zhì)粒，靈敏度與常規(guī)PCR相當(dāng)。TaqManPCR檢測CAEV和其他動(dòng)物病毒（比如，豬流感病毒、山羊痘病毒、牛白血病病毒、牛粘膜病病毒，尼帕病毒）無交叉反應(yīng)，顯示了良好的特異性；分別應(yīng)用TaqManPCR和常規(guī)PCR對(duì)來自陜西和天津的308份臨床樣品進(jìn)行了檢測，陽性率分別為7.8%和7.5%，結(jié)果

4、顯示所有PCR陰性的樣品均為TaqManPCR陰性，僅有1株P(guān)CR陰性的樣品呈現(xiàn)TaqManPCR陽性（1648vs.1748），兩者一致性為99.7%。TaqManPCR敏感特異可用于檢測感染動(dòng)物全血和外周血淋巴細(xì)胞中CAEV原病毒基因組DNA。根據(jù)完整env序列以及pGEMTCA4和pGEMTCA5序列的情況，用生物信息學(xué)軟件oligo6.0分別設(shè)計(jì)兩套引物，分別采用PCR和overlapPCR方法對(duì)env基因進(jìn)行完整克隆；結(jié)合測序