2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、南昌大學(xué)博士學(xué)位論文橙色紅曲菌中基于pyrG標(biāo)記的同源轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立姓名:王伯華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專(zhuān)業(yè):食品科學(xué)指導(dǎo)教師:許楊20100601AbstractInthispaper,pyrGgenefragmentwasclonedfromMonascusaurantiacusgenomicDNAusingdegenerateprimersdesignedwithCODEHOPstrategyAnditscompletesequence

2、wasobtainedbyaPCRbasedmethodforscreeningfosmidlibraryUridineauxotrophystrainsfrom彪aurantiacusAS34384wereisolatedbyresistanceto5FOAafterUVmutagenesisOnepositivecolonywasobtainedandnamedUM28,itwasfurtherconfirmedbysequenci

3、ngandtransformationTheformationofprotoplastconditionandtheregenerationofprotoplastconditionofUM28strainwereoptimized,andahomologoustransformationsystemusingpyrGasaselectionmarkerofUM28isestablishedAplasmidpGFPpyrGcontain

4、ingtheGFPexpressioncasseReWasconstructedandtransformedintoUM28protoplast,expressionoftransformedgenewasevaluatedusingtheGFPgeneThemajorfindingswereexpoundedasfollows:1AccordingtotheknownOrotidine5’phosphatedecarboxylase,

5、pyrGgenefragmentwasclonedfromMonascusaurantiacusgenomicDNAusingdegenerateprimersdesignedwithCODEHOPstrategyAnditscompletesequenceWasobtainedbyaPCR—basedmethodforscreeningfosmidlibrary(AccessionNoGU723506)Aftertheblastxco

6、mparison,theclonedgenewasconfirmedthatitwasMonascuspyrGgenewith81%sequenceidentitytothatofAspergillusflavusNRRL3357ItCanbeusedasaselectivemarkerforMonascushomologustransformationsystem;2ApyrGmutantstrainfrom肱aurantiacusA

7、S34384,namedUM28,wasisolatedbyresistanceto5FOAafterUVmutagenesisSequenceanalysisofthismutatedgenerevealedthatitcontainedapointmutationatnucleotideposition220causedsubstitutionofPr0一Ser,withinactivationofOMPdecasefunction

8、Complementationof膨aurantiacuspyrGmutantwasperformedbytransformingAspergillusoryzaepyrGgeneintoUM28,andittransformedUM28intouridineprototrophyUM28wasauridineauxotrophwimafrequencyofreversemutmionoflessthan10一,anditcouldbe

9、usedintheMonascushomologoustransformationsystem;3TheformationofprotoplastconditionandtheregenerationofprotoplastconditionofUM28strainwereoptimizedTwocomplementationplasmids,pAOPandpMAPwererespectivelytransformedintoproto

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