27235.cd45，cd90對(duì)分離得到大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度的鑒定

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：亟』：墅豳日期：絲f!：￡：蘭l中

2、國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)意即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論

3、文作者簽名：童!：莖塑指導(dǎo)教師簽名：埠日期：塑f!：￡：蘭L中文論著摘要CD45，CD90對(duì)分離得到大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度的鑒定目的探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BWMSCs)的分離方法：應(yīng)用流式細(xì)胞儀，用小鼠抗大鼠CD45，CD90檢測(cè)分離得到BWMSCs的純度。方法在無(wú)菌條件下，采集雙側(cè)股骨，脛骨，用適量DMED／F12培養(yǎng)液沖出骨髓。用比重為10739／ml的Percol

4、l分離液分離，取界面層，獲取單個(gè)核細(xì)胞，用PBS液以1000r／min離心洗滌，每次10min，共2次。分離的細(xì)胞以5x104／cm2個(gè)接種于培養(yǎng)瓶。培養(yǎng)體系為高糖EMDM／F12(1：1)，20％胎牛血清。在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5％C0：條件下培養(yǎng)，首次24h更換培養(yǎng)液，去掉未貼壁細(xì)胞。每3d換液1次。每天在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80％融合時(shí)，用1：1的01％胰蛋白酶和0OI％EDTA混合液消化，用含2％小牛血清的PB

5、S洗滌后制成10107／ml骨髓MSCs的單細(xì)胞懸液，加入EP管中。之后按說(shuō)明，取一定量CD90FITC和CD45PE加入EP管中。4“C避光孵育30rain，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果1、采用密度梯度離心法和貼壁法相結(jié)合可從大鼠骨髓中分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。新鮮分離細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察呈圓形，大小不均一。24h細(xì)胞貼壁，更換培養(yǎng)液后，見(jiàn)貼壁細(xì)胞呈圓形，橢圓形，多邊形。48h見(jiàn)貼壁細(xì)胞體積變大，大小不均一，其漿核分界清楚，折光性強(qiáng)。絕大多數(shù)