CTB-CS3基因表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)黃瓜的轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁(yè)
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1、植物生物反應(yīng)器是一種安全和廉價(jià)的蛋白生產(chǎn)系統(tǒng).但是其中一個(gè)限制因素是外源蛋白在值物中表達(dá)量低.為了優(yōu)化表達(dá)系統(tǒng),該試驗(yàn)構(gòu)建了分別將CTB/CS3蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞間質(zhì)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的pBinCTBatg/CStaa、pBinCTBsp/CStaa、pBinCTBsp/CSkdel植物表達(dá)載體及對(duì)照載體pBinCTBsp/CSkdel,分別通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草.對(duì)再生煙草進(jìn)行PCR檢測(cè),獲得了轉(zhuǎn)CTB/CS3基因植株.Western定量

2、分析結(jié)果顯示,將CTB/CS3定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的基因植株表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它類(lèi)型轉(zhuǎn)基因煙草.為了使黃瓜作為生物反應(yīng)器進(jìn)行抗腹瀉口服疫苗的生產(chǎn),在該試驗(yàn)中利用報(bào)告基因β-葡萄糖醛酸酶(GUS)對(duì)黃瓜品種649的遺傳轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了優(yōu)化.在黃瓜轉(zhuǎn)化與再生過(guò)程中,選擇黃瓜子葉、子葉節(jié)作為外植體優(yōu)于下胚軸.與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)過(guò)程中添加乙酰丁香酮(AS),共培養(yǎng)15min,分化培養(yǎng)基為MS+6-BA(1.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)+kam(50m

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