馬立克氏病病毒類白細胞介素8基因表達及生物學(xué)特性研究.pdf

1、馬立克氏病病毒(MDV)是一種致T細胞瘤的庖疹病毒,然而病毒的致腫瘤機制仍不十分清楚.該研究通過PT-PCR法,從感染MDV標(biāo)準(zhǔn)毒株648A、RB1B、MD11、VAI988、Z4、HVT感染的CEF細胞總RNA中擴增Vil-8基因序列.實驗結(jié)果表明,I型MDV毒株均可擴增出約430bp的cDNA片段,Ⅱ、Ⅲ型MDV未能擴增出相應(yīng)片段.將擴增出的基因片段克隆進載體pGEM-T easy中,構(gòu)建成pT-vIL8質(zhì)粒,進行測序,通過序列分析

2、證明,所獲得的648A、RB1B、MD11、CVI988毒株的vIL-8基因序列與所發(fā)表的GA株的vIL-8序列完全一致.這一結(jié)果表明,vIL-8基因在Ⅰ型馬立克氏病病毒基因組中為一高度保守序列,提高該序列可用于MDVⅠ型病毒的鑒定.為了進一步了解vIL-8的生物學(xué)活性,我們用限制性內(nèi)切酶BamHⅠ及EcoRⅠ酶切消化pT-vIL8質(zhì)粒,然后插入經(jīng)BamHⅠ及EcoRⅠ酶切好的原核表達載體pGEX-5X-3中,構(gòu)建成pGEX-vIL-8

3、質(zhì)粒,將pGEX-vIL-8質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,以IPTG誘導(dǎo)表達.研究結(jié)果證明,所構(gòu)建的表達質(zhì)粒能表達vIL8-GST融合蛋白,說明融合表達性質(zhì)粒pGEX-vIL8構(gòu)建正確.表達產(chǎn)物活性分析發(fā)現(xiàn),vIL-8基因重組產(chǎn)物具有趨化雞外周血淋巴細胞的活性,這一結(jié)果提示MDV在感染過程中,vIL-8吸引易感細胞,促進病毒感染,并可能參與了腫瘤的擴散和發(fā)展.細胞因子往往具有免疫調(diào)節(jié)作用,尤其在基因免疫過程中,該作用更為明顯.為了弄清