甘藍(lán)型油菜隱性核不育兩用系S45AB MS2Bnap基因的克隆及序列分析.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文甘藍(lán)型油菜隱性核不育兩用系S45ABMS2Bnap基因的克隆及序列分析姓名：李德謀申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：楊光偉裴炎200005013將MS2Bnap基因分為互有部分重疊的三段，并以此設(shè)計(jì)引物，以減數(shù)分裂期的cDNA為模板能穩(wěn)定地?cái)U(kuò)增出各自的三段產(chǎn)物，分別命名為：FragmentI、FragmentII、FragmentIII。而以單核期的eDNA為模板，無任何擴(kuò)增產(chǎn)物。由此可初步推斷，MS

2、2Bnap基因在單核期不表達(dá)，其表達(dá)主要是在減數(shù)分裂期，具有時(shí)間特異性。4利用己擴(kuò)增出的三段產(chǎn)物FragmentI、FragmentII、FragmentIII為模板，用引物Primerl(5AATGGAATGGACAGTTTACTGTC一3’)和Primer6(5’一TTTGACCTAAGCCCTTCC3，)進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)出一條與己報(bào)道的MS2Bnap基因長度相符的帶，約19kb。5將$45A(不育株)與$45B(可育株)擴(kuò)增產(chǎn)物F

3、ragmentI、FragmentII、Fragment111分別回收并克隆到載體pGEM。T上，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌XLIBlue中，可為基因功能研究提供大量的cDNA片段。6對(duì)$45A(不育株)與$45B(可育株)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了雙向測序。序列同源性分析表明：在甘藍(lán)型油菜隱性核不育兩用系S45AB上克隆的MS2Bnap基因與GeneBank公布的擬南芥核育性基因MS2和已報(bào)道的甘藍(lán)型油菜育性基因MS2Bnap的同源性分別為88％和99％。

4、7比較$45A(不育株)和$45B(可育株)的序列時(shí)發(fā)現(xiàn)：$45B的MS2Bnap基因序列(mf)與$45A的MS2Bnap基因序列(ms)有4處堿基存在差異，均涉及氨基酸的編碼，其中AAC／AATTCC／TCT和AAT／AAC為同義突變，編碼氨基酸未發(fā)生變化。另l處堿基為錯(cuò)義突變，$45B為加姐，$45A為AGA。其三聯(lián)體密碼對(duì)應(yīng)的氨基酸也發(fā)生了交化，AAA編碼賴氨酸，AGA編碼精氨酸。該變化可能與$45A的不育有關(guān)。1|4、關(guān)鍵詞甘