大豆疫霉3-磷酸磷脂酰肌醇在致病過程中的功能分析.pdf

1、大豆疫霉(Phytophthorasojae)引起的大豆(Glycinemax)根腐病是大豆生產(chǎn)上極其嚴(yán)重的病害之一;每年導(dǎo)致全球高達(dá)十幾億美元的直接經(jīng)濟(jì)損失。大豆疫霉作為一類半活體營(yíng)養(yǎng)的病原卵茵，在侵染寄主的初期營(yíng)活體營(yíng)養(yǎng)，待成功侵入之后轉(zhuǎn)入死體營(yíng)養(yǎng)階段，這其中伴隨著復(fù)雜的分子機(jī)制來(lái)操縱植物的細(xì)胞死亡。目前的研究發(fā)現(xiàn)，大豆疫霉分泌RxLR(Arg-X-Leu-Arg)類效應(yīng)因子如avirulenceprotein1b(Avr1b)等能

2、夠進(jìn)入寄主細(xì)胞，抑制植物的防衛(wèi)反應(yīng)，從而促進(jìn)自身的侵入和擴(kuò)展。RxLR類效應(yīng)因子的RxLR結(jié)構(gòu)域的功能是結(jié)合3-磷酸磷脂酰肌醇(PI3P)，結(jié)合后使得效應(yīng)因子可以不依賴病原菌的存在進(jìn)入寄主細(xì)胞，但是病原茵會(huì)在侵染過程中是否產(chǎn)生PI3P還尚未了解，本實(shí)驗(yàn)通過在大豆疫霉菌中過量表達(dá)PI3P特異結(jié)合的蛋白來(lái)研究了該化合物在致病過程中的功能及分布特征。
　　PI3P特異結(jié)合蛋白含有兩個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)的保守FYVE序列，由于能結(jié)合PI3P,在研究

3、中既可以用來(lái)作為PI3P定位的生物傳感器，又可特異性地降低機(jī)體內(nèi)該化合物的有效含量，來(lái)研究它的功能。本研究選取小鼠的Hrs基因的FYVE序列，分別構(gòu)建了加信號(hào)肽和不含信號(hào)肽的兩種載體，以區(qū)分疫霉菌胞內(nèi)外PI3P的功能和分布，運(yùn)用PEG介導(dǎo)的大豆疫霉穩(wěn)定轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)篩選得到FYVE過表達(dá)轉(zhuǎn)化子，表型分析發(fā)現(xiàn)，PI3P生物傳感器無(wú)論在胞內(nèi)外表達(dá)對(duì)大豆疫霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢都沒有明顯的影響。定位研究發(fā)現(xiàn)，不含信號(hào)肽的FYVE主要定位于大豆疫霉菌絲內(nèi)