S-生物丙烯菊酯免疫分析方法研究.pdf

1、目前，世界上使用的農(nóng)藥中手性農(nóng)藥的比例達(dá)到了25％，而擬除蟲菊酯類殺蟲劑中幾乎所有的農(nóng)藥都是手性農(nóng)藥。同一手性農(nóng)藥的各個(gè)對映異構(gòu)體間不僅對靶標(biāo)生物的殺蟲除草殺菌活性具有對映體選擇性，而且對非靶標(biāo)生物也會(huì)產(chǎn)生對映體選擇性的毒性。為了降低農(nóng)藥的使用量和保護(hù)環(huán)境免受侵害，對手性農(nóng)藥進(jìn)行檢測方法的研究則顯得十分有必要。
　　 免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡便、適宜現(xiàn)場監(jiān)控和同時(shí)篩選大量樣品等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)藥殘留快速檢測中發(fā)揮著重

2、要的作用。本研究以菊酯類殺蟲劑S-生物丙烯菊酯為研究對象，建立了S-生物丙烯菊酯的間接競爭ELISA法和ECL-ELISA法，并應(yīng)用于環(huán)境樣品中S-生物丙烯菊酯殘留檢測。
　　 設(shè)計(jì)合成S-生物丙烯菊酯半抗原，將半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制備免疫原和包被原，成功建立了基于多克隆抗體的S-生物丙烯菊酯的酶聯(lián)免疫分析方法。經(jīng)紫外光譜分析證明成功合成了免疫和包被用人工抗原，S-生物丙烯菊酯免疫原和包被原的

3、結(jié)合比分別為32∶1和10∶1。用免疫抗原免疫雄性新西蘭大白兔，獲得相應(yīng)的多克隆抗體，用間接非競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定S-生物丙烯菊酯抗體的效價(jià)達(dá)到8×105。通過方陣滴定法篩選包被抗原和抗體的最適工作濃度，進(jìn)一步研究有機(jī)溶劑、離子強(qiáng)度和pH值在間接競爭ELISA(ic-ELISA)中對抗體親和作用的影響，確立了S-生物丙烯菊酯間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法的最佳檢測條件為:40％甲醇、0.5 mol/L Na+、pH6.5。

4、在最優(yōu)條件下，建立了S-生物丙烯菊酯的ic-ELISA方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線。除與ES-生物丙烯菊酯、富右旋丙烯菊酯和丙烯菊酯有交叉反應(yīng)外，與大部分菊酯類農(nóng)藥沒有明顯的交叉反應(yīng)，表明抗體具有很高的立體選擇性。該方法的抑制中濃度IC50為0.089 mg/L，最低檢測限(IC10)為0.0025 mg/L。通過采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(ECL-ELISA)手段，IC50在此基礎(chǔ)上又降低了3.56倍，達(dá)到0.025 mg/L，最低檢測限(IC10

5、)降低了2.5倍，達(dá)到0.001 mg/L。
　　 以建立的ic-ELISA和ECL-ELISA分析方法，進(jìn)行了自來水、河水、蒸餾水和塵土的添加回收率試驗(yàn)，添加濃度分別為為0.05 mg/L(mg/kg)-0.5 mg/L（mg/kg），0.01mg/L(mg/kg)-0.1 mg/L(mg/kg)，添加回收率分別為90.7％-111.7％，78.9％-100.7％，變異系數(shù)分別為1.2％-6.5％，1.2％-3.9％。用氣相色