Vasa、卵泡抑素(FST)和抗繆勒氏管激素(AMH)在半滑舌鰨繁殖周期中的作用研究.pdf

1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)是我國近海的大型名貴經(jīng)濟魚類。本研究利用分子生物學(xué)和mRNA原位雜交技術(shù),分析了Vasa、卵泡抑素(follistatin,FST)、抗繆勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)在半滑舌鰨繁殖周期中的功能,所得結(jié)果與結(jié)論如下:
　　1.半滑舌鰨Vasa基因的克隆和表達
　　本研究克隆了半滑舌鰨Vasa基因的cDNA序列,其全長2

2、602bp,編碼包含722個氨基酸殘基的蛋白質(zhì),有一個經(jīng)選擇性剪切形成的亞型。推導(dǎo)的氨基酸序列含有DEAD-box家族特有的8個保守,N末端含有5個RGG重復(fù)和10個RG重復(fù)。組織表達分析表明,Vasa基因在性腺中表達量豐富,性腺外組織僅在心臟中有微量表達。
　　利用RT-PCR和mRNA原位雜交技術(shù)研究了csVasa在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達模式。在卵巢中,Vasa的表達量在初級卵黃期和囊泡期要顯著高于核周期和退化吸收期;精

3、巢中,Vasa在精子細胞增殖期的表達量要明顯高于精母細胞增殖期和精子成熟期。這些結(jié)果表明,Vasa可能在半滑舌鰨的配子發(fā)生中起重要作用。初級卵黃期卵巢的Vasa mRNA原位雜交結(jié)果顯示,Vasa mRNA在Ⅲ期卵母細胞的胞質(zhì)中均勻分布,外周皮層信號強度較高。
　　2.半滑舌鰨FST基因的克隆和表達
　　采用RACE技術(shù)克隆得到了半滑舌鰨FST的cDNA序列,其全長1455bp,編碼包含321個氨基酸殘基的蛋白質(zhì),屬于TGF

4、B家族。組織表達分析表明,FST、在半滑舌鰨13中組織中均有表達,其中在性腺中表達最高,腦和鰓中表達量較高,證明FST具有廣泛的生理作用。
　　利用RT-PCR技術(shù)研究了FST在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達模式。在卵巢中,FST的表達量核周期最高,初級卵黃期和囊泡期較高,推測FST抑制FSH刺激的卵母細胞發(fā)育的作用,而對LH無明顯作用;精巢中,FST在各個時期均有表達,并且精子細胞增殖期表達量較低,推測這是因為FST對芳香化酶的調(diào)

5、節(jié)功能所致。
　　3.半滑舌鰨AMH基因的克隆和表達
　　采用RT-PCR技術(shù)克隆得到了半滑舌鰨AMH的cDNA片段序列,長度955bp,編碼318個氨基酸,屬于TGFβ家族。組織表達分析表明,AMH在僅半滑舌鰨的性腺中表達,并且在精巢中的表達量要高于卵巢。
　　利用RT-PCR技術(shù)研究了AMH在性成熟半滑舌鰨繁殖周期的表達模式。在卵巢中,AMH在初級卵黃期和囊泡期表達量較高,在退化吸收期最高,推測魚類的AMH與哺乳類