三眠蠶誘導(dǎo)技術(shù)及其發(fā)育相關(guān)蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、用抗保幼激素類(lèi)藥物處理可以誘導(dǎo)四眠蠶成為三眠蠶，三眠蠶繭絲具有纖度細(xì)而均勻、強(qiáng)伸度好的特性，可以繅制高檔優(yōu)質(zhì)細(xì)旦生絲，是開(kāi)發(fā)特種用途生絲的理想原料，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和利用價(jià)值。本文通過(guò)用抗保幼激素類(lèi)藥物金鹿三眠素處理普通四眠蠶，在獲得三眠蠶的基礎(chǔ)上，利用凝膠電泳及生物質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)家蠶血液和脂肪體的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行了分析，以探討抗保幼激素對(duì)家蠶發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)理。取得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.以多化性家蠶品種P50為材料，探討抗

2、保幼激素誘導(dǎo)三眠蠶的技術(shù)體系。結(jié)果表明，以400ppm濃度藥液對(duì)家蠶進(jìn)行添食處理，三眠蠶的誘導(dǎo)效果最好;3齡處理區(qū)和4齡處理區(qū)的誘導(dǎo)率分別為94％和96％;三眠蠶齡期縮短，體質(zhì)增強(qiáng);繭絲纖度分別為1.224D和0.785D。
　　 2.應(yīng)用建立的三眠蠶誘導(dǎo)技術(shù)，對(duì)6個(gè)家蠶品種的誘導(dǎo)效果進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，三眠蠶的誘導(dǎo)效果及生長(zhǎng)發(fā)育與家蠶品種、處理時(shí)期有很大關(guān)系，表現(xiàn)為二化性雜交品種誘導(dǎo)成績(jī)高于多化性雜交品種，中系品種高于日系品

3、種。在春秋兩季蠶的比較中發(fā)現(xiàn)，秋蠶的繭質(zhì)成績(jī)不如春蠶，但是繭絲纖度較細(xì)，3齡處理區(qū)和4齡處理區(qū)繭絲纖度最細(xì)分別可達(dá)1.079D和0.803D。綜合分析發(fā)現(xiàn)，在供試的6個(gè)品種中，“兩廣二號(hào)”、“秋豐×白玉”、“白玉×秋豐”3個(gè)品種比較適合于誘導(dǎo)、生產(chǎn)三眠蠶。
　　 3.用400ppm濃度抗保幼激素處理4齡起蠶，處理后72小時(shí)后，提取處理組和對(duì)照組的血液與脂肪體蛋白，利用1-DE/MS技術(shù)進(jìn)行分離與鑒定，結(jié)果在血液蛋白質(zhì)差異性條帶中

4、檢測(cè)到82個(gè)候選蛋白，并鑒定了其中26個(gè)組分，分別屬于17種蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)亞基。并且發(fā)現(xiàn)，處理組中30kD和70kD蛋白質(zhì)組分比較豐富;血液中存在溶酶體硫醇還原酶IP30前體1型和2型，可能與三眠蠶抗病性有關(guān)。其次，在脂肪體蛋白質(zhì)差異條帶中檢測(cè)到了49個(gè)候選蛋白，鑒定了其中的12個(gè)組分，主要包括熱激蛋白、貯藏蛋白以及與基因轉(zhuǎn)錄、翻譯有關(guān)的酶類(lèi)和轉(zhuǎn)錄因子等。
　　 4.在1-DE/MS分析基礎(chǔ)上，對(duì)處理組和對(duì)照組的脂肪體蛋白質(zhì)進(jìn)行

5、了2-DE分析，結(jié)果檢測(cè)到表達(dá)量差異在2倍以上的蛋白質(zhì)組分有62個(gè)，表達(dá)差異在3倍以上的蛋白質(zhì)組分有21個(gè)，其中特異性表達(dá)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)有6個(gè)。進(jìn)一步對(duì)表達(dá)差異在3倍以上的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行了膠內(nèi)酶切和質(zhì)譜分析，結(jié)果成功鑒定了18個(gè)蛋白質(zhì)組分，其中與家蠶蛻皮變態(tài)密切相關(guān)的有30kD蛋白、熱激蛋白Hsp90、蛻皮激素氧化酶、蛻皮激素磷酸磷酸酯酶、醛酮還原酶、家蠶幼蟲(chóng)血清蛋白、煙堿型乙酰膽堿受體α4亞基2亞型前體和絲氨酸蛋白酶抑制劑等，并探討了這些