苦蕎萌發(fā)期生理活性及其蛋白抗菌性的研究.pdf

1、本文主要研究了苦蕎萌發(fā)期生理活性及其蛋白抗菌性研究。本研究分為四個部分：
　　 第一章研究了不同萌發(fā)條件下對苦蕎發(fā)芽力指標(發(fā)芽勢、發(fā)芽率、芽長、鮮重)的影響。光照處理實驗得出，自然光處理、暗處理、黑+光處理和全光處理的苦蕎發(fā)芽力指標依次呈現(xiàn)下降趨勢。其中全光照處理條件下發(fā)芽力指標，與其他光照處理在P=0.01水平上差異極顯著，這說明苦蕎是需暗培養(yǎng)的作物。溫度處理實驗得出，自然溫度、37℃+30℃處理、30℃處理和37℃處理的苦

2、蕎發(fā)芽勢、發(fā)芽率和芽長依次下降，在P=0.05水平上差異顯著。實驗說明，苦蕎在變溫萌發(fā)的生態(tài)條件下發(fā)芽更好。磁場處理實驗得出，在0T-0.6T的范圍內(nèi)，隨著磁場強度的增加，苦蕎發(fā)芽力指標表現(xiàn)為上升趨勢。磁場作用時間為5min時，發(fā)芽率、芽長、鮮重均達到最大值，分別為85％、9.4cm、0.137g。金屬離子處理實驗得出，Al3+濃度達到1mmol/L時對苦蕎的幼苗生長具有顯著的抑制作用；選擇Cu2+濃度為0.4 mg/L的浸種條件，可以

3、提高蕎麥種子的發(fā)芽勢。低濃度的高錳酸鉀可以促進種子萌發(fā)和生長，高濃度的高錳酸鉀具有抑制作用；KMnO4濃度為200mg/L時，發(fā)芽勢、發(fā)芽率、芽長和鮮重達均到最大值，分別為80％、100％、10.2cm和0.140g。
　　 第二章研究了苦蕎萌發(fā)期GABA的變化趨勢及應(yīng)用。本文選用了兩種測定方法，一種是Berthelot比色法，另一種是鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生與高效液相色譜(High Performance Liquid C

4、hromatography，HPLC)相結(jié)合測定GABA的方法。前者適用于GABA的定性分析，后者適用于GABA的定量分析。所得出的色譜工作條件為，色譜柱：C18流動相：50mM NaAC(pH=6.8)：甲醇：四氫呋喃=65:34:1；檢測器：FLD：Ex：338nm，Em：425nm；流速：1.0mL/min。測定結(jié)果表明在苦蕎萌發(fā)1～10天內(nèi)，隨著萌發(fā)天數(shù)增加，GABA的含量隨之增多。在第4天時達到最大值為26.96mg/100g

5、，隨后GABA的含量逐漸減少。GAD酶活力在萌發(fā)1～10天與GABA呈現(xiàn)相同的變化趨勢，說明GAD和GABA在萌發(fā)過程中關(guān)系密切。通過中心組合設(shè)計試驗優(yōu)化提高GABA在苦蕎萌發(fā)中的含量，利用DesignExpert分析數(shù)據(jù)，得出最佳條件是磁場強度0.265T，紫外作用時間10.85min，銅離子濃度為0.046mg/L。得到富含GABA的苦蕎飲料得到最優(yōu)的配方為：苦蕎第4天萌發(fā)物10g/L，白砂糖30g/L，蜂蜜0.8g/L，苦蕎飲料中

6、GABA含量為18.57mg/100g。
　　 第三章研究了苦蕎黃酮類化合物的提取，確定最佳提取條件為乙醇濃度70％、提取溫度60攝氏度、料液比1:50、提取時間480min。通過鋁鹽法測定黃酮含量，得到實驗如下結(jié)論：隨著苦蕎萌發(fā)時間的延長，黃酮含量隨之增加，在第7天達到最大值。金屬離子對苦蕎萌動期處理，實驗結(jié)果表明處理樣品與對照樣品呈現(xiàn)差異顯著。低濃度的金屬離子作用能夠提高苦蕎黃酮的含量，而高濃度的金屬離子作用能夠抑制苦蕎黃酮

7、的生成。KMnO4對苦蕎黃酮的作用最為明顯。實驗了建立一種HPLC測定異黃酮的方法，其色譜工作條件為色譜柱：ZorbaxSB-C18，流速：1 mL/min，柱溫：30℃，檢測波長：260 nm，進樣量：10μL。實驗表明，苦蕎在萌發(fā)第4天能夠產(chǎn)生少量的大豆黃苷，為21.13μg/g。
　　 第四章研究了苦蕎蛋白的抗菌性。通過考馬斯亮藍法測得，隨著萌發(fā)天數(shù)的增加，苦蕎中總蛋白含量不斷下降且趨勢逐漸放緩。通過硫酸銨鹽析法提取苦蕎中

8、的粗蛋白，選用DEAE-Sepharose Fast Flow對苦蕎籽粒中的粗蛋白進行分離純化，得到BP1、BP2、BP3三個組分。采用打孔法分別進行抗菌實驗表明BP3在25％濃度時對鼠傷寒沙門氏菌的抑菌圈為1.0mm；在50％濃度時，對草莓灰霉產(chǎn)生的抑菌圈為0.8mm；培養(yǎng)48h，100％濃度下對草莓灰霉的抑菌圈最大，為2mm；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、青霉、酵母菌抑制活性很低或沒有活性。采用SDS-PAGE方法對苦蕎