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1、MDRTB菌株的耐藥表型和分子特征分析Thecharacteristicsofphenotypeandgenotypeofmultidrugresistanttuberculosisisolates碩士研究生:范齊文學(xué)號:09211300003導(dǎo)師:吳文娟教授導(dǎo)師小組成員:高謙教授范小勇副研究員公共衛(wèi)生臨床中心二0—二年五月復(fù)□大學(xué)碩十畢業(yè)論文中文摘要中文摘要結(jié)核病己經(jīng)成為全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題,全球估計13人口感染了結(jié)核分枝桿菌(My
2、cobacteriumtuberculosisMTB)。據(jù)WHO最新公布統(tǒng)計數(shù)據(jù),2010年全世界有880萬新發(fā)結(jié)核病,大約145萬人死于結(jié)核病。近年來結(jié)核病的耐藥情況亦愈加嚴(yán)重,耐多藥結(jié)核(multidrugresistanttuberculosisMDRTB)及廣泛耐藥結(jié)核(extensivelydrugresistanttuberculosisXDRTB)患者數(shù)量逐年增加,給結(jié)核病的控制帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。本研究通過對上海市公共衛(wèi)生
3、臨床中心和南京市胸科醫(yī)院臨床分離MDR及XDRTB菌株的耐藥表型進(jìn)行分析,了解兩家醫(yī)院結(jié)核耐藥的現(xiàn)狀和趨勢;通過分子線性探針雜交方法分析MDRTB菌株的基因型耐藥特點(diǎn),明確其耐藥基因突變譜;運(yùn)用分子流行病學(xué)方法對分子線性探針雜交初篩出的復(fù)合感染菌株進(jìn)行基因分型,確認(rèn)耐藥結(jié)核病中復(fù)合感染的存在。(1)M(jìn)DRTB菌株耐藥表型特征分析本研究收集上海市公共衛(wèi)生臨床中心和南京市胸科醫(yī)院分離并經(jīng)初篩鑒定為MDRTB的菌株,利用MGIT960儀器法
4、檢測菌株對異煙肼(isoniazidINH)、利福平(rifampinRFP)、乙胺丁醇(ethambutol,EMB)、氧氟沙星(ofloxacinOFX)、莫西沙里(moxifloxacinMFX)及阿米卡星(amikacin,AMK)等藥物的敏感性;用MGIT960法、Wayne法及自行建立的微孔板法檢測所選菌株對B比嗪酷胺(pyrazinamidePZA)的敏感性。結(jié)果顯示:①94株MDRTB菌株中,34株對EMB耐藥,16株對
5、AMK耐藥,51株對OFX藥,52株對MFX耐藥,耐藥率分別為36.2%,17.0%54.3%和55.3%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)13株為XDRTB菌株。②從94株MTB中隨機(jī)挑選53株用MGIT960及Wayne法檢測其對PZA的敏感性,經(jīng)MGIT960檢測,27株對PZA敏感,26株對PZA耐藥經(jīng)Wayne試驗(yàn)檢測,27株為PZase陽性,26株為PZase陰性。③53株P(guān)ZA敏感性檢測的結(jié)核分枝桿菌,經(jīng)微孔板法檢測,12株在規(guī)定時間內(nèi)未生長,
6、重復(fù)試驗(yàn)后結(jié)果相同。41株在514天內(nèi)獲得結(jié)果。將耐藥臨界濃度定為100pgml,微孔板法結(jié)果與MGIT960結(jié)果一致率達(dá)97.6%。以上結(jié)果表明MDRTB對喹諾酮類藥物及PZA的耐藥率較高,而對AMK的耐藥率相對較低;PZA微孔板法檢測結(jié)核分枝桿菌對PZA敏感性的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,有望成為實(shí)驗(yàn)室檢測方法推廣使用。(2)M(jìn)DRTB菌株耐藥基因型特征分析為了解MDRTB#丨株耐藥基因型特點(diǎn),本研究利用分子線性探針雜交技術(shù)對94株MDRTB菌
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