捻轉(zhuǎn)血矛線蟲抗伊維菌素蟲株P(guān)-糖蛋白基因多態(tài)性研究.pdf

1、羊胃腸道線蟲對(duì)驅(qū)蟲藥的抗藥性已成為全世界面臨的嚴(yán)重問題，其中以捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）的抗藥性危害最甚。然而，我國(guó)在這方面的研究相對(duì)較少，鑒于目前羊生產(chǎn)實(shí)踐中寄生蟲病防治的需要，本課題從以下三個(gè)方面對(duì)抗藥性捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的P-糖蛋白基因進(jìn)行了研究，結(jié)果如下：
　?。?）以羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲抗伊維菌素蟲株、抗阿苯達(dá)唑（丙硫咪唑）蟲株和敏感蟲株為研究對(duì)象，分別擴(kuò)增其P-糖蛋白基因的部分片段，將所得片段克隆后測(cè)

2、序，并進(jìn)行分析。結(jié)果表明，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲 P-糖蛋白基因片段在敏感株之間的同源性較高，達(dá)99.1％，而具有抗性的P-糖蛋白基因片段與敏感株的同源性則較低，在80.2%～93.0%之間，且有多處核苷酸發(fā)生了突變。經(jīng)對(duì)片段中的兩段開放閱讀框翻譯后分析，發(fā)現(xiàn)抗伊維菌素蟲株、抗阿苯達(dá)唑蟲株與敏感蟲株相比，第6個(gè)氨基酸位點(diǎn)均由谷氨酸（Glu,E）突變?yōu)槔i氨酸(Val,V)。
　?。?）以羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲抗伊維菌素蟲株為研究對(duì)象，根據(jù)P-糖蛋白基

3、因中的一段開放閱讀框設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR-SSCP方法分析該片段的多態(tài)性，并分別測(cè)定不同基因型的基因序列。結(jié)果表明，兩種基因型中ORF的序列雖然有四個(gè)堿基發(fā)生了突變，但翻譯后的氨基酸序列則完全相同；與敏感株相比，所有受檢蟲體的第6個(gè)氨基酸均由谷氨酸（Glu,E）突變?yōu)槔i氨酸(Val,V)，說明該突變?cè)诳挂辆S菌素蟲株中普遍存在。
　　（3）以羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲抗伊維菌素蟲株和敏感株蟲體為研究對(duì)象，運(yùn)用PCR-RFLP方法進(jìn)行分析。結(jié)果表

4、明，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲伊維菌素敏感株蟲體P-糖蛋白基因PCR產(chǎn)物不能被內(nèi)切酶Kpn I切開，而抗伊維菌素蟲株蟲體PCR產(chǎn)物則可被內(nèi)切酶切開；酶切后統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，10條敏感株蟲體全部為敏感純合子（BB）；在所檢測(cè)的20條抗伊維菌素株蟲體中，抗性純合子（AA）6個(gè)（30%），雜合子（AB）13個(gè)（65%），敏感性純合子（BB）1個(gè)（5%）。其中，AB基因型頻率最大，為優(yōu)勢(shì)基因型，其次為AA型，BB型比例最低?？剐缘任换駻為優(yōu)勢(shì)基因，其頻率為62