捻轉(zhuǎn)血矛線蟲六種酶蛋白體外對山羊外周血單個核細胞功能的影響.pdf

1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）是毛圓科(Trichostrongylidae)血矛屬（Haemonchus）線蟲，是嚴重危害牛羊等反芻動物的一種重要寄生蟲，蟲體主要寄生于宿主第四胃，偶見于小腸，以吸食宿主血液為營養(yǎng)來源。目前，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病雖然在免疫學研究上有了重要的進展，但至今仍無商品化的疫苗出現(xiàn)，所以發(fā)掘新的抗原、進一步研究蟲體抗原的特性對于疫苗的開發(fā)尤為重要。本文對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的谷胱甘肽過氧化物酶(glu

2、tathione peroxidase，HC29)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、谷氨酸脫氫酶(glutamatedehydrogenase，GDH)、烯醇化酶(enolase，ENO)、磷酸丙糖異構(gòu)酶(triosephosphateisomerase，TPI)及醛縮酶(aldolase，ALD)進行了重組表達，進而研究這六種重組酶蛋白體外與山羊外

3、周血單個核細胞的結(jié)合情況;對外周血單個核細胞細胞因子表達和增殖的影響以及對巨噬細胞吞噬功能和分泌NO的影響。
　　1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲六種酶蛋白的表達及體外與山羊外周血單個核細胞的結(jié)合試驗
　　根據(jù)實驗室構(gòu)建的質(zhì)粒表達并純化六種重組酶蛋白。無菌采集山羊頸靜脈的抗凝血，分離外周血單個核細胞，將重組蛋白以5μg/mL的濃度加入細胞中，放置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2小時后收集細胞，應(yīng)用免疫熒光抗體技術(shù)檢測到重組蛋白谷胱甘肽過氧化物酶和甘油醛-3-磷

4、酸脫氫酶能夠在體外與山羊外周血單個核細胞結(jié)合，其余蛋白未檢測出這一特點。
　　2捻轉(zhuǎn)血矛線蟲六種酶蛋白對山羊外周血單個核細胞細胞因子表達的影響
　　根據(jù)GenBank中山羊IL-2、IL-4、IL-I0、IL-17、IFN-γ和TGF-β的序列設(shè)計符合熒光定量試驗的引物。以β-Actin為內(nèi)參，用HC29、GAPDH、ENO、ALD、TPI和GDH重組蛋白按濃度梯度分別刺激外周血單個核細胞后得到的cDNA為模板進行熒光定量試

5、驗，檢測不同重組蛋白不同濃度刺激后細胞因子的變化情況。結(jié)果顯示，在重組蛋白HC29組中，IL-10和IFN-γ的表達量在三個濃度梯度（10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL）下均顯著高于對照組(P＜0.01);GAPDH組中，IL-2、IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ在高濃度40μ g/mL下均顯著高于對照組(P＜0.01);其余四種重組蛋白組中各個細胞因子的變化不明顯(P＞0.05)。
　　3捻轉(zhuǎn)血矛線蟲六種

6、酶蛋白對山羊外周血單個核細胞細胞增殖的影響
　　為了檢測這六種重組蛋白對山羊外周血單個核細胞的增殖作用，將重組蛋白分別與細胞共培養(yǎng)，用CCK-8法檢測增殖效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HC29在三個濃度梯度下與對照組比較具有極顯著的增殖效果(P＜0.01);重組蛋白GAPDH的三個濃度下的增殖結(jié)果較顯著;其余的四種重組蛋白均有一定的增殖效果，但與對照組比較均不顯著(P＞0.05)。
　　4捻轉(zhuǎn)血矛線蟲六種酶蛋白對山羊巨噬細胞吞噬功能和分泌N