TSH方法識別馬鈴薯塊莖器官發(fā)生基因及其表達分布研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、莖是高等植物的重要器官之一,馬鈴薯匍匐莖及塊莖是莖的天然變異,揭示其發(fā)生機制,不僅對馬鈴薯莖器官發(fā)生、而且對以莖器官為收獲對象的作物的相關(guān)研究具有重要的參考價值,然而,匍匐莖及塊莖變異形成的分子機理及調(diào)控方式至今尚屬未知。
   本研究以不同成熟期馬鈴薯的匍匐莖和塊莖RNA為材料,構(gòu)建匍匐莖及塊莖的消減cDNA文庫,以期識別其形成特異表達基因,而后檢測特異表達基因在不同基因型不同器官、發(fā)育階段中表達,確定其表達分布特點,為最終揭

2、示塊莖發(fā)生分子機理奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
   1、以兩基因型匍匐莖RNA為檢測組(tester)或驅(qū)動組(driver)、塊莖RNA為驅(qū)動組(driver)或檢測組(tester),通過轉(zhuǎn)錄子消減雜交(TSH),構(gòu)建了匍匐莖和塊莖消減cDNA文庫各2個,菌落觀察統(tǒng)計及其后的檢測結(jié)果顯示,文庫中重組率為95%左右,滿足文庫質(zhì)量要求。
   2、對文庫進行菌落PCR篩選,隨機挑取142個白色克隆分析發(fā)現(xiàn)117個為陽性

3、結(jié)果,陽性率為82.4%,文庫插入片段在100bp-1000bp之間;對42個陽性克隆進行了測序,序列經(jīng)生物信息學分析,得到唯一非重復的EST序列21個。
   3、經(jīng)GenBank數(shù)據(jù)庫blastx和blastn對21個EST進行了同源性比對,結(jié)果顯示匍匐莖及塊莖消減文庫中,未識別且功能未知基因分別為26.7%和66.7%,已知功能基因涉及信號傳導、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白合成代謝、生物與非生物脅迫等過程。
   4、RT-PC

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