常用菌草的細(xì)胞核型和ISSR分析.pdf

1、為了構(gòu)建菌草種質(zhì)資源圃，完善菌草種質(zhì)的信息，為進(jìn)一步的研究提供理論基礎(chǔ)，因此探討常用菌草的親緣關(guān)系及構(gòu)建其DNA指紋圖譜成為亟需解決的問題，然而異地引種導(dǎo)致了命名混亂。本文主要內(nèi)容有常用菌草的狼尾草屬中24種植物ISSR遺傳多樣性研究及采用傳統(tǒng)壓片法對象草（Pennisetum purpureum）和巨菌草（Pennisetum spp.）的細(xì)胞染色體核型分析。目的是從分子水平上探討狼尾草屬植物間的親緣關(guān)系，為其遺傳育種及大面積推廣應(yīng)用

2、奠定理論基礎(chǔ)；從細(xì)胞和分子水平上為鑒定巨菌草品種提供理論依據(jù)。具體結(jié)果如下：
　　1）優(yōu)化象草的核型分析的反應(yīng)條件
　　本研究采用傳統(tǒng)壓片法進(jìn)行染色體分析，分別比較取材部位、預(yù)處理、解離，選擇最優(yōu)的條件。結(jié)果表明：取材部位為根尖，預(yù)處理的方法是0.05％秋水仙素處理2 h，1 M鹽酸解離8 min，為最優(yōu)結(jié)果。
　　2）象草和巨菌草染色體核型分析
　　象草和巨菌草的染色體形態(tài)較為一致，大部分由中部（m）和近中部（

3、sm）著絲粒的染色體組成，其中象草和巨菌草的核型公式分別為2n=4x=28=20m+8sm、2n=4x=28=16m+8sm+4st；象草和巨菌草染色體相對長度組成分別為2n=4x=28=6L+6M2+10M1+6S、2n=4x=28=4L+8M2+10M1+6S。研究認(rèn)為：象草和巨菌草的不對稱系數(shù)都接近50%，均屬于較原始的類型，核型分類均為2A型。
　　3）采用單因素實驗建立了象草ISSR-PCR引物UBC847的反應(yīng)體系及程

4、序和優(yōu)化其他引物的退火溫度
　　引物UBC847的反應(yīng)體系：在20μL的反應(yīng)體系中，引物濃度0.5μM，DNA量40ng。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性2min，95℃變性45 s，50.4℃退火45s，72℃延伸60 s，35個循環(huán)，72℃延伸5min，4℃保存。保持反應(yīng)體系及程序，只設(shè)定退火溫度變化范圍，優(yōu)化其他77條引物的退火溫度。
　　4）ISSR標(biāo)記的聚類分析
　　采用ISSR分子分析狼尾草屬24個品種間的遺傳關(guān)系，

5、結(jié)果表明：從78條引物中共篩選出13個引物，共擴(kuò)增出303條帶，其中多態(tài)性條帶為297條，多態(tài)位點達(dá)98.0%，13條引物擴(kuò)增譜帶范圍為15~37條，分布范圍較寬，每條引物擴(kuò)增26.9個多態(tài)性條帶。實驗表明在這24個品種間具有較高的遺傳多樣性。利用UPGMA聚類分析結(jié)果，當(dāng)相似性系數(shù)為0.826時可分為4類。
　　5）闡述了巨菌草和象草的親緣關(guān)系
　　巨菌草和象草染色體數(shù)目是一致的，形態(tài)有些差別即在染色體核型公式和組成上有一