茶樹葉片抗寒相關蛋白的篩選.pdf

1、植物在低溫作用下由于基因表達的改變而誘發(fā)合成新蛋白質。這些新蛋白質具有高度的親水性和熱穩(wěn)定性，能夠保護植物細胞免受低溫傷害。目前，人們對大多數植物進行了抗冷性誘導實驗，均發(fā)現低溫脅迫會引起植物細胞中可溶性蛋白質含量發(fā)生變化，并有特異蛋白的產生，且與植物的抗寒性密切相關。
　　 茶樹葉片中蛋白質的含量約占干物重的25％，其中大部分存在于細胞質中或與膜不緊密結合，可以用極性溶劑(如水、稀酸、稀堿或稀鹽溶液)進行提取，這部分蛋白質統稱

2、為可溶性蛋白質，包括熱穩(wěn)定和熱不穩(wěn)定蛋白質，主要為各種酶及一些生理活性蛋白。茶樹在受到低溫脅迫時，其葉片組織細胞會以分解組蛋白或是其他物質轉化的方式積累大量可溶性蛋白，用此方式來增加細胞液的濃度從而降低細胞液的冰點以抵抗低溫環(huán)境。
　　 茶樹是多酚、色素含量特別高的植物，在葉片研磨時，茶多酚又極易氧化，形成大量的氧化產物，這些物質嚴重干擾著電泳過程。本實驗對茶樹葉片采用丙酮干粉制備法，改良丙酮沉降法和三氯乙酸-丙酮制干粉法三種蛋

3、白質提取方法，并對SDS-PAGE電泳結果進行了比較分析，發(fā)現利用改良丙酮沉降法提取蛋白，不僅提取效率高，而且雜質干擾少，得到的電泳結果，蛋白條帶清晰，數量多。利用這一方法對冷馴化下不同品種茶樹葉片抗寒相關蛋白進行了研究，在云抗43和舒茶早中分別發(fā)現了與抗寒相關的23kd下調蛋白和51kd上調蛋白，獲得了滿意的蛋白SDS-PAGE分析結果。
　　 進一步對一年生舒茶早枝條進行4℃低溫處理三天后，提取葉片的蛋白質，進行雙向電泳實驗

4、，并用PDQuest軟件分析比較舒茶早枝條葉片在低溫處理下的蛋白表達譜，得到了46個量變倍數大于 1.5倍的差異斑點，其中低溫處理上調表達的蛋白點有31個，減弱表達的蛋白點有15個，推測這些差異蛋白點可能與低溫脅迫相關。
　　 根據資料，茶樹蛋白的等電點一般集中在4-6.5，綜合雙向電泳圖譜上蛋白點的重復性，分離度，表達量各因素，選取7個蛋白點用基質輔助激光解吸／電離飛行時間質譜(MALDI—TOFMS)進行肽質量指紋譜的分析，