抗蘿卜細(xì)菌性軟腐病的銀杏內(nèi)生細(xì)菌的初步研究.pdf

1、為了探明銀杏內(nèi)生細(xì)菌在抗病蟲方面的潛能，本研究從浙江杭州、山東泰安、河南鄭州、福建南平以及福建農(nóng)林大學(xué)校內(nèi)采集來的銀杏樣本中共分離得到154株內(nèi)生細(xì)菌，從中篩選出了57株對蘿卜軟腐病菌Pectobacterium carotovorumsubsp．carotovorum、番茄細(xì)菌性潰瘍病菌Clavibacter michiganensis subsp．michiganensis、番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌Pseudomonas syringae

2、 pv．tomato、西瓜細(xì)菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp．citrulli、水稻細(xì)菌性條斑病菌Xanthomonasoryzae pv．oryzicola、楊桃細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌P．syringae pv．a(chǎn)verrhoii病菌都有抑制作用的菌株，占分離總數(shù)的37％。對蘿卜軟腐病菌有拮抗作用的菌株共有65株，占分離總數(shù)的42．21％，最大透明圈半徑達(dá)6．75mm。
　　 本研究經(jīng)篩選后獲得了2株對蘿卜塊

3、莖軟腐病有顯著防病效果的菌株hyll、zy2，接種后，塊莖發(fā)病時間延遲，病斑擴(kuò)展緩慢，接種7d后的防治效果分別可達(dá)77．8％和50％。菌株hyll、zy2對蘿卜幼苗軟腐病的防治也有一定的效果，接種內(nèi)生菌的幼苗發(fā)病率低，在發(fā)病后不易倒伏，接種7d后防治效果分別為53．3％和64．3％。另外，這兩株內(nèi)生菌對蘿卜幼苗有明顯的促生作用。經(jīng)過生理生化測定、16S rDNA和gyrB基因序列鑒定，菌株hyll、zy2均為解淀粉芽孢桿菌Bacillu

4、samylolipuefaciens。
　　 為了進(jìn)一步確定分離菌株的內(nèi)生性，本研究選用菌株hyll，構(gòu)建了攜帶gfp基因和kan基因的菌株hyll—gfp。采用摩擦涂葉接種后，菌株hyll—gfp在銀杏葉片中的數(shù)量呈現(xiàn)先增后減，之后趨于穩(wěn)定，其種群數(shù)量在5．54×104 cfu/(g．fw)左右。采用灌根法對蘿卜接種后，菌株hyll—gfp在根、莖、葉中的數(shù)量均呈現(xiàn)先增后降的趨勢。接種40 d后從銀杏和蘿卜體內(nèi)均能分離到大量的

5、標(biāo)記細(xì)菌，說明菌株hyll能穩(wěn)定存在于銀杏和蘿卜體內(nèi)。
　　 本研究將分離得到的154株菌株利用aiiA基因引物序列通過PCR擴(kuò)增，從中獲得了6株含aiiA基因的內(nèi)生菌株。這6株內(nèi)生菌在平板上對蘿卜軟腐病菌沒有抑制作用，但對蘿卜果實(shí)和幼苗的軟腐病防治均有一定的效果。其中菌株X3、gbb5的防治效果最好，都在50％以上。而且這2株內(nèi)生菌對蘿卜幼苗也有顯著的促生作用。經(jīng)過16S rDNA序列鑒定，菌株x3為蘇云金芽胞桿菌B．thur