富士蘋果MdCBF1基因的功能分析.pdf

1、植物在生長階段，會經(jīng)受很多非生物脅迫，干旱、鹽害、低溫和氧化脅迫等非生物脅迫嚴重影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，并導致環(huán)境退化。在這種逆境條件下，植物也會對各種逆境信號作出反應，傳遞脅迫信號，生理生化做出響應，從而來增強適應性。這就要求對各種功能基因的表達進行精確調(diào)控。在植物的受到逆境脅迫時，轉錄因子對調(diào)控相關功能基因的表達發(fā)揮著關鍵作用。
　　 AP2/EREBP類轉錄因子是一類調(diào)控植物發(fā)育和脅迫耐性的十分重要的轉錄因子，目前在擬南芥和水稻研究

2、的比較深入，這些轉錄因子主要與植物的干旱，高鹽或低溫信號有關。CBF類轉錄因子屬于AP2/EREBP類的一種，參與低溫、干旱或高鹽等非生物脅迫。目前，在蘋果等木本植物的相關研究較少。本文根據(jù)報道的蘋果CBF1轉錄因子的cDNA序列從富士蘋果中克隆了MdCBF1基因，并對其進行生物信息學分析和逆境脅迫下的表達分析。MdCBF1轉錄因子基因的核苷酸序列分析表明，該基因含cDNA全長660bp，編碼一個含219個氨基酸的蛋白開放閱讀框。其核苷

3、酸編碼蛋白質理論分子量為23.94kDa，等電點(pI)為5.21。MdCBF1和擬南芥的CBF類轉錄因子的氨基酸序列具有很高的同源性，其中由56個氨基酸之間構成AP2的核心結構域，在第41和113位分別有CBF蛋白中特異的氨基酸序列PKKRAGRKKFRETRHP和FADSAWR，并且氨基酸序列符合典型的CBF類轉錄因子特征，N-端和C-端富舍酸性氨基酸，推測為轉錄激活區(qū)，N-端有-個富含堿性氨基酸區(qū)推測為核定位信號區(qū)(NLS)，進一

4、步分析發(fā)現(xiàn)，MdCBF1屬于DREB-A1亞族類轉錄因子。Real-Time PCR技術對MdCBF1基因在不同逆境脅迫下的轉錄水平進行了分析表明，MdCBF1基因的表達受低溫、干旱脅迫的誘導，但是對NAA和ABA沒有明顯響應。組織表達檢測表明，MdCBF1在根、莖、葉，種子的表達差別不大。
　　 為了進一步分析MdCBF1基因的功能，本研究構建了農(nóng)桿菌-植物雙元表達載體，通過蘸花法轉化擬南芥，獲得轉MdCBF1基因的擬南芥植株