間接ELISA檢測(cè)胸膜肺炎放線桿菌型特異性抗體的研究.pdf

1、本研究分別提純了胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacilus pleuropneumoniae,APP)血清1～10型的莢膜多糖抗原和脂多糖抗原，建立了檢測(cè)APP型特異性抗體的間接ELISA。通過(guò)血清型間的交叉反應(yīng)試驗(yàn)，篩選出各血清型菌的最佳型特異性抗原，為APP的準(zhǔn)確診斷與分型提供新的方法。 分別提取APP的莢膜多糖抗原和脂多糖抗原用于建立檢測(cè)各型抗體的間接ELISA，通過(guò)ELISA反應(yīng)條件的優(yōu)化，確定了最佳反應(yīng)條件：莢膜多糖

2、抗原包被濃度為13μg/mL，脂多糖抗原包被濃度為11μg/mL；封閉液為含1％牛血清白蛋白(BSA)的0.01mol/L pH7.4的PBS，37℃封閉60min；血清工作條件為200倍稀釋，37℃孵育60min；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)工作條件為4000倍稀釋，37℃孵育30min；阻斷試驗(yàn)表明：莢膜多糖和脂多糖均能阻斷該型陽(yáng)性血清與相應(yīng)包被抗原的反應(yīng)，具有特異性。初步確定了判定標(biāo)準(zhǔn)：以P/N值≥2.1判

3、定為陽(yáng)性，P/N<2.1判定為陰性。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)表明該法重復(fù)性較好。 以APP各血清型菌的莢膜多糖和脂多糖作為包被抗原建立間接ELISA檢測(cè)各血清型菌的陽(yáng)性血清，1型和4型的莢膜多糖及2型和10型的脂多糖只與同型菌的陽(yáng)性血清反應(yīng)，與其它型陽(yáng)性血清不反應(yīng)，以這四種抗原建立的間接ELISA具有良好的型特異性，可用于檢測(cè)APP1型、2型、4型和10型的抗體，而其它各型的莢膜多糖和脂多糖與異型血清具有不同程度的交叉反應(yīng)。 以APP