胸膜肺炎放線桿菌血清學(xué)分型和基因分型的研究.pdf

1、胸膜肺炎放線桿菌是豬傳染性胸膜肺炎的病原,該試驗(yàn)中,將引進(jìn)的胸膜肺炎放線桿菌13種血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株,在TM/SN培養(yǎng)基上增殖,收獲菌體,滅活后用于免疫家兔,制備了分型血清.分別應(yīng)用玻片凝集試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和免疫電泳試驗(yàn),對(duì)抗血清的特異性、效價(jià)和保存期進(jìn)行了監(jiān)測,結(jié)果表明,制備的抗血清有較好的特異性,在4℃下保存1個(gè)月、-20℃下8個(gè)月和-80℃下1年其效價(jià)無明顯變化.用制備的分型血清采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)PCR陽性的胸膜肺炎放線桿菌地方分離

2、菌株進(jìn)行了鑒定,分別為血清2、3和8型,說明抗血清可用于分離菌株的鑒定分型.為了能通過檢測送檢血清了解動(dòng)物感染病原的血清型,將增殖并收獲的胸膜肺炎放線桿菌13個(gè)血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株,采用洗滌直接離心、超聲波處理和酚抽提等方法,制備不同血清型抗原,通過玻片凝集試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳,以標(biāo)準(zhǔn)抗血清作為參考,評(píng)價(jià)各種診斷抗原的特異性和靈敏性.分別應(yīng)用研制的3種抗原對(duì)來自湖北、湖南、江西、河南和安徽等五省的155份送檢血清進(jìn)行檢測,初步結(jié)果

3、表明定型抗原及其檢測方法能準(zhǔn)確地進(jìn)行血清學(xué)鑒別診斷和血清分型.基因分型是近幾年來用于細(xì)菌分型的新技術(shù),能克服經(jīng)典的血清學(xué)分型方法對(duì)部分菌株不能進(jìn)行分型的缺點(diǎn),已經(jīng)應(yīng)用于其它細(xì)菌的分型.該研究中,根據(jù)胸膜肺炎放線桿菌各血清型之間某些毒力相關(guān)因子的基因差異,設(shè)計(jì)不同的引物,分別對(duì)各血清型外毒素(Apx)、外膜蛋白(OmlA)、轉(zhuǎn)鐵蛋白B(TbpB)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到不同的特異性片段,可區(qū)分胸膜肺炎放線桿菌生物Ⅰ型13個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株血清型中的8

4、個(gè)血清型,建立了基因分型方法,常見病原菌如大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、波氏桿菌和鏈球菌在apx-PCR中不能擴(kuò)增出特異性片段.對(duì)分離的12株野生菌用此方法進(jìn)行分型,其結(jié)果與常規(guī)的血清學(xué)分型結(jié)果一致,為血清2、3和10型.將此分型系統(tǒng)用于臨床送檢的126份肺臟和42份扁桃體檢測,結(jié)果表明,可直接檢測出胸膜肺炎放線桿菌感染,并能判定感染病原的血清型.該方法還可以將一些尚未定型的菌株進(jìn)行歸類,彌補(bǔ)了血清學(xué)方法的不足,而且,縮短了診斷的時(shí)間.