BmCPV與BmNPV多角體對異源蛋白的包埋特性研究.pdf

1、家蠶質型多角體病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)和家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)是感染家蠶分別引起中腸型膿病和血液型膿病的病原。昆蟲病毒的多角體對包埋的病毒粒子具有很好的保護作用。為了深入了解多角體的包埋特性,探索多角體的包埋機制,本研究主要開展了BmCPV與BmNPV多角體對異源蛋白的包

2、埋特性研究。
　　 1、BmCPV多角體蛋白組學研究
　　 利用LC-MS／MS對從患病家蠶中腸純化的BmCPV多角體進行了蛋白組學研究,共鑒定了28種蛋白質,其中23種蛋白質來自宿主家蠶,顯示在BmNPV多角體形成過程中宿主蛋白可以被包埋進BmCPV的多角體中。對這23種家蠶蛋白的分子結構分析發(fā)現(xiàn),部分蛋白的結構與BmCPV多角體蛋白的結構或病毒結構蛋白VP3的N末端結構有相似之處,推測BmCPV多角體對宿主蛋白的包埋

3、與相互之間蛋白結構相似有關。
　　 2、穩(wěn)定轉化細胞表達BmCPV多角體蛋白及其包埋蛋白分析
　　 將帶有BmCPV多角體蛋白基因的表達載體pIZT／V5-His-polh轉染BmN細胞,經(jīng)抗生素Zeocin篩選獲得穩(wěn)定表達多角體蛋白的轉化細胞株。熒光觀察顯示,轉化細胞的細胞質中有呈綠色熒光的病毒多角體,但純化后的多角體無明顯的綠色熒光,表明BmCPV的多角體蛋白在無其它病毒蛋白的存在下可自我裝配成多角體,熒光蛋白沒有被

4、多角體包埋。串聯(lián)質譜分析結果發(fā)現(xiàn),純化的多角體中存在2種來自家蠶的泛素與核糖體蛋白S27a(ubiquitin and ribosomal protein S27a)和BTB／POZ蛋白(BTB／POZ domain containing protein),結構分析顯示,這2種蛋白的三級結構與BmCPV多角體蛋白的左手結構呈現(xiàn)一定的相似性,推測多角體蛋白可以與結構相似的蛋白相互作用并對其進行包埋;以修飾型線性家蠶桿狀病毒BmPAK6感染

5、穩(wěn)定轉化細胞,回復感染結果顯示,純化的多角體裂解液對BmN細胞具感染性,表明BmCPV多角體能包埋異源病毒粒子BmPAK6；純化的多角體及多角體裂解液能使X-gal顯色呈色,表明β半乳糖苷酶能被質型多角體包埋。
　　 3、BmNPV ODV蛋白組學研究
　　 用LC-MS／MS對從血液型膿病蠶血液中純化的BmNPV的ODV進行了蛋白組學研究,共鑒定了37種蛋白質,其中27種蛋白為BmNPV自身編碼,10種蛋白為家蠶編碼,

6、并發(fā)現(xiàn)多角體中存在部分病毒非結構蛋白,表明BmNPV多角體在宿主體內組裝過程中,可以對宿主蛋白進行包埋。
　　 4、穩(wěn)定轉化細胞表達BmNPV多角體蛋白
　　 將帶有BmNPV多角體蛋白基因的重組表達載體pIZT／V5-His-polh轉染BmN細胞,經(jīng)抗生素篩選獲得了穩(wěn)定表達BmNPV多角體蛋白的轉化細胞,熒光顯微鏡觀察顯示,在轉化細胞的細胞核內存在具熒光的多角體顆粒,細胞核膨大,出現(xiàn)類似BmNPV感染的細胞病變,表明