馬鈴薯懸浮細胞系的建立及小G蛋白AtRop1,StRac1的亞細胞定位.pdf

1、植物細胞懸浮培養(yǎng)是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養(yǎng)基里培養(yǎng)單細胞及小細胞團的培養(yǎng)系統(tǒng)，是植物生物技術(shù)中最有用的研究手段之一。小G蛋白是一類單體GTP結(jié)合蛋白，具有GTPase活性，植物細胞內(nèi)的小G蛋白家族統(tǒng)稱為 ROPs（Rho-related GTPase from plant），大量的研究結(jié)果已經(jīng)證明ROP-GTP酶在植物防衛(wèi)反應體系的建成過程中具有十分重要的調(diào)控作用。本研究主要利用馬鈴薯品種底西瑞建立適于遺傳轉(zhuǎn)化的馬鈴薯懸浮細胞

2、體系，將擬南芥 AtRop1及馬鈴薯 StRac1的野生型，激活型和非激活型分別與綠色熒光蛋白（GFP）融合，用農(nóng)桿菌介導的瞬時轉(zhuǎn)化和PEG（聚乙二醇）介導的脂質(zhì)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化煙草葉片和馬鈴薯懸浮細胞，利用熒光顯微鏡觀察GFP的位置進而確定小G蛋白的亞細胞定位。研究結(jié)果表明：
　　1.馬鈴薯品種底西瑞（Desiree）懸浮細胞生長呈典型的S型，生長周期為2周左右。添加2 mg/L2,4-D及1mg/L NAA的MS培養(yǎng)基最適合底西

3、瑞懸浮細胞的生長。細胞的最佳接種量為7.5mL/50mL。
　　2.利用農(nóng)桿菌瞬時表達的方法，將擬南芥中的小G蛋白AtRop1定位在煙草葉片表皮細胞的細胞膜上，激活型的AtCA-Rop1和失活型的AtDN-Rop1分別定位在細胞膜和細胞質(zhì)中；馬鈴薯小G蛋白StRac1和其激活型的StCA-Rac1定位在煙草葉片表皮細胞的細胞膜上，而失活型的StDN-Rac1主要表達在細胞質(zhì)和細胞核中。
　　3.利用PEG法轉(zhuǎn)化馬鈴薯懸浮細胞