塊菌香氣及多糖的研究.pdf

1、塊菌(Perigord Truffle)是與樹(shù)木共生的藥食兩用菌，以其味道鮮美、氣味獨(dú)特、具有較高的醫(yī)療保健價(jià)值而聞名于世，但迄今為止，國(guó)內(nèi)外研究?jī)H局限于塊菌的人工栽植及粗加工方面，對(duì)塊菌活性成分研究甚少。塊菌所含有的特殊香氣及活性多糖在提高性能力、抗腫瘤、抗衰老等方面具有特殊的療效，可以廣泛應(yīng)用在食品工業(yè)、化工業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)塊菌香氣及多糖的系統(tǒng)研究為塊菌資源的充分利用開(kāi)辟了廣闊的市場(chǎng)前景。
　　 本文以四川會(huì)東野

2、生塊菌(T.huidongense)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用同時(shí)蒸餾萃取法、超聲溶劑萃取法、固相微萃取法三種萃取方法，對(duì)其香氣成分進(jìn)行萃取比較，然后進(jìn)行GC-MS鑒定分析；并且對(duì)塊菌多糖的分離純化、理化特性及基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，主要研究結(jié)果如下：
　　 1.塊菌香氣成分的提取和分析鑒定研究：采用超聲溶劑萃取、同時(shí)蒸餾萃取、固相微萃取三種提取方法對(duì)會(huì)東塊菌的香氣物質(zhì)進(jìn)行提取后，再用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索對(duì)其進(jìn)行成分分

3、析和鑒定。研究結(jié)果表明：采用超聲溶劑萃取法的萃取物中共分離出了80個(gè)峰，鑒定出了65種化合物，占總組分的93.59％；用同時(shí)蒸餾萃取法的萃取物中共分離出了91個(gè)峰，鑒定出了67種化合物，占總組分的90.45％；用固相微萃取法的萃取物中共分離出了64個(gè)峰，鑒定出了50種化合物，占總組分的75.15％。由此可見(jiàn)，三種萃取方法中，同時(shí)蒸餾萃取法最優(yōu)，如再以超聲溶劑萃取法和固相微萃取法進(jìn)行輔助，三者優(yōu)劣互補(bǔ)，就能對(duì)會(huì)東塊菌的香氣化學(xué)成分進(jìn)行全面

4、的綜合的測(cè)定分析。其結(jié)果共分離鑒定出142種風(fēng)味物質(zhì)，其中共有成分10種，主要香氣成分23種，進(jìn)一步對(duì)其主要香氣成分進(jìn)行分析鑒定，得出其主要香氣成分主要由烯醇類(lèi)、烯類(lèi)、酯類(lèi)、酸類(lèi)和酚類(lèi)物質(zhì)構(gòu)成。
　　 2.塊菌多糖的提取研究：采用酸提法和堿提法，分別配制不同濃度的提取液進(jìn)行超聲浸提。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：同超聲中性水浸提法相比，上述兩種方法所提多糖的絮凝度很差，不易同雜質(zhì)分開(kāi)，且得率較低，故本實(shí)驗(yàn)對(duì)上述兩種方法不做研究，而采用超聲中性

5、水浸提法。以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，采用響應(yīng)面法對(duì)主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化并得到回歸模型，并通過(guò)方差分析對(duì)塊菌中所含的活性多糖的得率與超聲處理時(shí)間、提取溫度、料液比和超聲功率進(jìn)行優(yōu)化組合。結(jié)果表明：該模型能夠反映響應(yīng)值的變化，其二次方程為：
　　 Y=3.30+0.14X1+0.08X2-0.056X3+0.27X4+0.11X1X2+0.15X1X3-0.18X1X4+0.048X2X3-0.51X2X4+0.022X3X4-0.1

6、4X12-0.25X22-0.50X32-0.41X42。其模型擬合程度良好，實(shí)驗(yàn)誤差較小，確定其最佳提取條件為：超聲功率為105 W，提取時(shí)間為40 min，料液比為25:1，溫度為75℃。在此條件下，塊菌多糖的得率達(dá)到3.48％。
　　 3.水溶塊菌多糖(WPST)的純化研究：水溶塊菌多糖(WPST)經(jīng)Sevag法脫蛋白、透析、醇沉、纖維素DEAE-52和Sephadex G-100分離純化得到兩種組分：PST-A、PST-

7、W，其最終的得率分別為0.12％、0.41％。
　　 4.PST-A、PST-W的理化性質(zhì)研究：PST-A和PST-W，經(jīng)常壓凝膠柱法和高效液相色譜法鑒定為均一多糖；兩種多糖均不含蛋白質(zhì)、核酸，為非淀粉類(lèi)多糖，均易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，其PST-W分子量為128059.9 Dal，PST-A分子量為729140.5 Dal。
　　 5.PST-W，PST-A的結(jié)構(gòu)研究：通過(guò)紅外光譜、液相色譜、甲基化、核磁共振等方法對(duì)P

8、ST-W、PST-A兩種多糖組分進(jìn)行分析，得出PST-A、PST-W的糖環(huán)構(gòu)型均為吡喃型，其中PST-A在865cm-1處有吸收峰，表明其為a-型結(jié)構(gòu)。液相色譜分析其單糖組成得到：PST-W由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，PST-A由葡萄糖組成，PST-W中的單糖摩爾比為：葡萄糖：甘露糖：半乳糖=3.01:1.00:0.96。通過(guò)甲基化和核磁共振對(duì)PST-A的結(jié)構(gòu)進(jìn)行的驗(yàn)證，可知PST-A為a-D-(1→6)連接的線(xiàn)性葡聚糖，其分子結(jié)構(gòu)式