晉、魯、豫三省雞桿菌感染情況調(diào)查及RAPD分型方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、雞輸卵管囊腫是困擾我國(guó)蛋雞生產(chǎn)的重要疾病之一。該病主要侵害產(chǎn)蛋雞群的呼吸道和生殖道,臨床上以母雞產(chǎn)蛋數(shù)量和質(zhì)量下降、產(chǎn)蛋高峰缺失、蛋殼變形、輸卵管炎,并最終因?qū)е螺斅压苣夷[而表現(xiàn)“企鵝”狀大腹雞為主要特征。鴨源雞桿菌(Gallibacteriumanatis)與本病的發(fā)生有關(guān)。
　　 利用雞桿菌微量乳膠凝集試驗(yàn)對(duì)我國(guó)河南、山東、山西等不同地區(qū)86家臨床健康蛋雞場(chǎng)1314份血清樣品和河南省12家發(fā)病雞場(chǎng)384份血清樣品進(jìn)行了血清學(xué)

2、檢測(cè),對(duì)雞桿菌的感染情況進(jìn)行了調(diào)查。結(jié)果表明:我國(guó)部分地區(qū)存在雞桿菌感染,86個(gè)雞場(chǎng)雞桿菌感染率為44.37％(583/1314),雞桿菌血清Ⅰ型感染率為11.80％(155/1314),Ⅱ型感染率為22.98％(302/1314),Ⅳ型感染率為9.60％(126/1314):12個(gè)發(fā)病雞場(chǎng)雞桿菌感染率為48.4％(186/384),雞桿菌血清Ⅰ型感染率為4.4％(17/384),Ⅱ型感染率為21.4％(82/384),Ⅳ型感染率為37

3、.5％(144/384)。結(jié)果表明:目前該病在我國(guó)部分地區(qū)已經(jīng)存在雞桿菌感染和流行,不同品種和日齡的雞均可發(fā)生,但不同地區(qū)雞桿菌感染率存在顯著差異,峪口和青腳麻雞的血清感染率比良鳳花和三黃麻雞的血清感染率高,開產(chǎn)前蛋雞的血清感染率低于開產(chǎn)后的血清感染率。
　　 以9株雞桿菌中國(guó)分離株為研究對(duì)象,根據(jù)GenBank上登錄的相關(guān)序列,針對(duì)雞桿菌三個(gè)管家基因rpoB,、infB和atpD設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆和序列測(cè)定分析。擴(kuò)

4、增出三個(gè)管家基因rpoB、infB和atpD基因部分片段,核苷酸序列長(zhǎng)度分別為566bp、531bp、1441bp,測(cè)序結(jié)果已登陸到GenBank。將9株雞桿菌中國(guó)分離株的三個(gè)管家基因部分核苷酸序列與已知的雞桿菌屬和巴氏桿菌科其它屬相關(guān)參考株的相應(yīng)基因序列比較分析并構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果表明:雞桿菌中國(guó)分離株間的核苷酸同源性為98.1％～100％,雞桿菌中國(guó)分離株與國(guó)外雞桿菌分離株間的同源性為89.2～97.1％,雞桿菌中國(guó)分離株與巴氏桿菌科

5、其它屬參考株間的同源性為82.1％～83.5％；進(jìn)化樹共形成三大分支,分別為雞桿菌中國(guó)分離株分支、國(guó)外雞桿菌分離株分支和巴氏桿菌科其它屬分離株分支。雞桿菌中國(guó)分離株間的親緣關(guān)系較近,國(guó)內(nèi)雞桿菌與國(guó)外雞桿菌間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。
　　 對(duì)9株雞桿菌中國(guó)分離株進(jìn)行了血清分型,并應(yīng)用8條隨機(jī)引物對(duì)該9株雞桿菌中國(guó)分離株和3個(gè)參考菌株(1株巴氏桿菌、1株大腸桿菌和1株鏈球菌)共12株細(xì)菌做隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)分型研究。結(jié)果表明,

6、9株雞桿菌中國(guó)分離株分別屬于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8條隨機(jī)引物中有3條呈現(xiàn)良好的多態(tài)性和穩(wěn)定性,可產(chǎn)生差異顯著的指紋圖譜。采用SPSS13.0軟件分析了不同菌株間的遺傳距離,并依此繪制出菌株間的親緣關(guān)系樹狀圖。12株細(xì)菌共分為4個(gè)聚類群,其中9株雞桿菌中國(guó)分離株位于同一聚類群中,且又可分為4個(gè)聚類亞群。3個(gè)參考菌株各自形成一個(gè)獨(dú)立的聚類群。不同血清型的雞桿菌菌株具有相似的指紋圖,同一血清型的菌株