豬腮腺分泌蛋白表達(dá)特性及表達(dá)調(diào)控元件的研究.pdf

1、腮腺分泌蛋白(PSP)由于它的功能與免疫相關(guān)，引起了人們的關(guān)注。為了弄清PSP的表達(dá)情況，以及它與α-AMY(α-Amylase)表達(dá)的關(guān)系，本研究根據(jù)已知的cDNA序列設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR、熒光定量PCR(Q-PCR)對(duì)豬及小鼠的PSP、AMY在腮腺生后發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，豬與小鼠的PSP在腮腺生后發(fā)育的各時(shí)期都是高效表達(dá)的，而且PSP的表達(dá)量隨發(fā)育期呈動(dòng)態(tài)變化；并且與AMY的變化方向一致，推測(cè)二者存在協(xié)

2、同性表達(dá)。隨后的Northern雜交和Western雜交證實(shí)了，PSP在mRNA水平和蛋白水平也是高效表達(dá)的。　　對(duì)豬PSP的全長(zhǎng)氨基酸序列進(jìn)行了抗原決定簇分析，推測(cè)豬PSP有4個(gè)抗原決定簇，分別位于PSP蛋白的22-37aa，41-59aa，180-195aa以及C-端。經(jīng)過比較，按其中之一合成短肽，將短肽與匙孔血藍(lán)蛋白連接，免疫家兔，獲得了抗豬PSP抗血清。從蛋白質(zhì)水平對(duì)其表達(dá)情況進(jìn)行了研究。在整個(gè)研究過程中，將a-唾液淀粉酶及三

3、磷酸甘油醛脫氫酶的表達(dá)情況作為對(duì)照。研究發(fā)現(xiàn)PSP在豬及小鼠中都呈腮腺特異性高效表達(dá)，表達(dá)量在不同發(fā)育期呈動(dòng)態(tài)變化，且始終高于GAPDH。并且在6周齡小鼠腮腺中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)20KDa的蛋白，能與PSP抗體發(fā)生反應(yīng)?！　≡诘诙糠种?，首先利用RLM-5’RACE進(jìn)行了豬PSP轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的定位，結(jié)果表明，通過RLM-5’RACE得到的序列比現(xiàn)有的cDNA序列的5’端長(zhǎng)39個(gè)堿基。分析發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的豬PSP基因的開放閱讀框(ORF)有誤，豬O