rhFGF8a高效表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá).pdf

1、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-8a(FibroblastGrowthFactor-8a，F(xiàn)GF8a)是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族(FibroblastGrowthFactorFamily，F(xiàn)GFs家族)的第8個(gè)成員FGF8的a亞型，不僅是胚胎發(fā)育階段必需的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，更有多種生物學(xué)功能，能夠高效安全地促進(jìn)組織損傷的修復(fù)，還在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中起重要的營(yíng)養(yǎng)和誘導(dǎo)作用，因此有廣闊的臨床應(yīng)用前景。重組人FGF8a(recombinanthumanfib

2、roblastgrowthfator-8a，rhFGF8a)是將人FGF8a基因經(jīng)過(guò)體外改造克隆后以生物工程菌表達(dá)得到的多肽。具有與天然FGF8a一致的活性。同時(shí)，與從天然動(dòng)物組織中提取得FGf8a相比，更具有產(chǎn)量高、成本低，資源豐富的優(yōu)點(diǎn)?！　”疚乃U述的研究?jī)?nèi)容，是rhFGF8a課題的一個(gè)部分，是廣州拜迪生物醫(yī)藥有限公司與新西蘭皇家科學(xué)院合作項(xiàng)目的子課題。主要目的是構(gòu)建新的高效表達(dá)rhFGf8a的載體，并選擇合適的表達(dá)宿主對(duì)其進(jìn)行

3、表達(dá)，完成高效表達(dá)rhFGF8a的上游工作?！　”狙芯坎捎梅肿涌寺〖夹g(shù)、PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)rhFGF8a基因進(jìn)行改造，再分別構(gòu)建到pET22b(+)和pET28a(+)兩質(zhì)粒上，以大腸桿菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)pLysS進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到具有活性的rhFGF8a多肽。并且比較了新構(gòu)建的兩種質(zhì)粒與前期rhFGF8a課題研究所構(gòu)建的rhFGF8a原質(zhì)粒在兩種表達(dá)宿主中的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)基因改造后的r