小麥矮腥黑粉菌分子檢測(cè)體系的建立及侵染循環(huán)的觀察.pdf

1、小麥矮腥黑粉菌（Tilletia controversa Kühn, TCK）引起的小麥矮腥黑粉?。╓heat dwarf bunt disease, DB）是一種系統(tǒng)侵染性病害，是極難防治的國(guó)內(nèi)外重要檢疫性病害之一。在生物學(xué)性狀上，小麥矮腥黑粉菌與小麥網(wǎng)腥黑粉菌、小麥光腥黑粉菌等多種腥黑粉菌極為相似，采用傳統(tǒng)檢疫手段難以將其區(qū)分。因此，有必要研究開(kāi)發(fā)快速、準(zhǔn)確的病害分子檢測(cè)技術(shù)。真菌在寄主體內(nèi)以菌絲體形式發(fā)育為冬孢子完成整個(gè)侵染循環(huán)，

2、與寄主演化形成和諧互作模式。
　　本試驗(yàn)依據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期篩選TCK獨(dú)有661bp大小的基因組差異片段設(shè)計(jì)TCK特異性引物，建立分子檢測(cè)技術(shù)體系同時(shí)應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡和電子顯微鏡觀察研究TCK與寄主互作的細(xì)胞學(xué)特征和超微結(jié)構(gòu)觀察。研究結(jié)果如下:
　　1.成功建立了兩套常規(guī) PCR檢測(cè)體系，目的條帶分別為372、112bp。建立的 PCR檢測(cè)體系特異性強(qiáng)，能擴(kuò)增出不同菌株的 TCK DNA片段，而對(duì)Tilletia tritic

3、i Tul(TCT)的不同菌株和其他近源種 DNA都不能擴(kuò)增；PCR可檢測(cè)出模板 DNA為1個(gè)冬孢子。該特異檢測(cè)體系，可簡(jiǎn)單而快速地鑒定小麥矮腥黑穗菌冬孢子或小麥早期組織是否侵染菌絲體。
　　2.建立TaqMan探針?lè)ê蚐YBR Green I熒光染料法Real-time PCR檢測(cè)體系，兩檢測(cè)體系中對(duì)重組質(zhì)粒的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.1fg，比常規(guī) PCR的靈敏度高出2~3個(gè)數(shù)量級(jí)，可用于小麥矮腥黑穗病的早期診斷和小麥矮腥黑穗菌與其近

4、源種小麥網(wǎng)腥黑穗菌的鑒定。
　　3.分別采用兩種PCR技術(shù)對(duì)小麥不同生長(zhǎng)期的發(fā)病情況進(jìn)行了動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明檢測(cè)最早可在一葉期早期檢出感病小麥樣品的陽(yáng)性信號(hào)。根據(jù)定量 PCR監(jiān)測(cè)結(jié)果分析，侵染菌絲體 DNA含量極低，熒光定量 PCR檢測(cè)體系靈敏度高于常規(guī) PCR檢測(cè)體系，更適合于小麥系統(tǒng)侵染性病害的無(wú)癥樣品的早期監(jiān)測(cè)。
　　4.在激光共聚焦顯微鏡下觀察了小麥各生長(zhǎng)時(shí)期不同組織的侵染過(guò)程，人工接種侵染后菌絲體隨生長(zhǎng)點(diǎn)移動(dòng)，侵染