大麥堅(jiān)黑粉菌遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及其侵染機(jī)制初探.pdf

1、大麥堅(jiān)黑粉菌（Ustilago hordei）是一類引起大麥產(chǎn)生黑粉狀病穗的真菌，嚴(yán)重危害全球的大麥生產(chǎn)。本論文研究了大麥堅(jiān)黑粉菌的生理特性及其侵染機(jī)制，建立了大麥堅(jiān)黑粉菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系，并對(duì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子作了優(yōu)化，獲得了如下主要結(jié)果：
　　 1．用兩個(gè)真菌基因表達(dá)啟動(dòng)子gpdA和hsp70分別替換質(zhì)粒pCAMBIA1301中的35S啟動(dòng)子，構(gòu)建了真菌表達(dá)載體3XpgpdA-1301和3×phsp70-1301。然后進(jìn)一步引入GF

2、P報(bào)告基因，獲得了載體3×pgpdA-1301-GFP和3×phsp70-1301-GFP。這四個(gè)載體均可用于大麥堅(jiān)黑粉菌的遺傳轉(zhuǎn)化，其轉(zhuǎn)化子可通過(guò)載體上的潮霉素抗性基因或GFP進(jìn)行篩選。
　　 2．通過(guò)對(duì)影響大麥堅(jiān)黑粉菌生長(zhǎng)狀態(tài)條件因子如培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基pH和培養(yǎng)基組成等的分析和優(yōu)化，確定了適合于大麥堅(jiān)黑粉菌生長(zhǎng)的較佳條件：溫度23℃，pH7.0。培養(yǎng)基組成對(duì)黑粉菌生長(zhǎng)影響較小，低濃度碳源、氮源即可滿足生長(zhǎng)，且鹽離子對(duì)生長(zhǎng)影響

3、較小。
　　 3．比較了PEG-CaC12法、電擊法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)(ATMT)法對(duì)大麥堅(jiān)黑粉菌的轉(zhuǎn)化效率，明確ATMT法顯著優(yōu)于其他兩種方法。然后在ATMT方法基礎(chǔ)上，對(duì)影響其遺傳轉(zhuǎn)化效率的主要因子進(jìn)行了優(yōu)化，得到優(yōu)化條件為：AS濃度200-400 mM，預(yù)培養(yǎng)時(shí)間12-18h，共培養(yǎng)時(shí)間48-72h。
　　 4．通過(guò)觀察大麥堅(jiān)黑粉菌體外配對(duì)、侵染擬南芥和大麥等寄主的過(guò)程，初步明確了其侵染機(jī)制及對(duì)寄主產(chǎn)生的影響。大麥堅(jiān)黑粉