抗營養(yǎng)因子對牙鲆(Paralichthys olivaceus)利用大豆蛋白源的影響.pdf

1、本文選擇我國典型的肉食性魚類牙鲆(Paralichthys olivaceus)為研究對象，采用傳統(tǒng)養(yǎng)殖實驗、體外細胞培養(yǎng)和胃內灌喂三種不同的實驗模式比較研究影響牙鲆利用大豆蛋白的因素，闡明水生動物不能有效利用植物性蛋白源的原因。研究內容包括：(1)大豆皂甙對牙鲆攝食、生長和組織學的影響；(2)大豆異黃酮對牙鲆攝食、生長和組織學的影響；(3)三種大豆抗營養(yǎng)因子對牙鲆腸上皮細胞形態(tài)、存活率、增殖、膜完整性和功能的影響；(4)等攝食條件下用

2、豆粕替代魚粉對牙鲆生長、飼料效率和表觀消化率的影響。主要研究結果如下： (1)以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，小麥粉為糖源，以三氧化二釔為外源性指示劑，制成4種等氮、等能(粗蛋白49.1％，總能20.1 KJ/g)的實驗飼料，使飼料中大豆皂甙實際含量分別達到0(對照組)、0.08％、0.32％和0.64％，研究不同大豆皂甙含量對牙鲆(2.58±0.01 g)攝食、生長、飼料效率、表觀消化率和組織學的影響。實驗在室內循環(huán)海水養(yǎng)殖

3、系統(tǒng)中進行，每個處理設置三個重復，每天投喂2次，達飽食水平。分別在養(yǎng)殖實驗開始、28 d和結束時對牙鲆進行稱重。實驗結果表明，隨著飼料中大豆皂甙水平的升高，牙鲆攝食率、平均體重、魚體粗脂肪含量和飼料粗蛋白表觀消化率均顯著下降(P＜0.05)。在實驗前28 d，隨著飼料中大豆皂甙含量的提高，牙鲆的攝食率呈線性下降趨勢(r=-0.869，P＜0.001)，但試驗結束時各組間攝食率相比較差異不顯著(P＞0.05)。與對照組相比較，無論在28

4、d還是試驗結束時，飼料中添加0.64％大豆皂甙都顯著降低了牙鲆的平均體重(P＜0.001)。添加0.32％的大豆皂甙在28 d時的平均體重顯著低于對照組(P＜0.05)，但是試驗結束時平均體重與對照組沒有顯著差異(P＞0.05)。高濃度的大豆皂甙(0.64％)還造成了牙鲆肝臟和后腸組織的病理性變化。通過分析認為，高含量的大豆皂甙顯著抑制了牙鲆的攝食和生長性能，因此在以大豆制品來替代魚粉飼喂牙鲆時不應該忽略大豆皂甙的抗營養(yǎng)作用。

5、(2)以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，小麥粉為糖源，以三氧化二釔為外源性指示劑，制成4種等氮、等能(粗蛋白49.1％，總能20.1 KJ/g)實驗飼料，使飼料中大豆異黃酮實際含量分別達到0(對照組)、0.1％、0.4％和0.8％，研究不同大豆異黃酮含量對牙鲆(2.58±0.01 g)攝食、生長、飼料效率、表觀消化率和組織學的影響。實驗在室內循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行，每個處理設置三個重復，每天投喂2次，達飽食水平。實驗結果表明，在飼料中添

6、加0.1％和0.4％的大豆異黃酮對牙鲆攝食、生長、飼料效率、魚體組成、表觀消化率和組織學結構均沒有顯著影響(P＞0.05)。而與對照組相比較，飼料中添加0.8％大豆異黃酮顯著降低了牙鲆的平均體重、魚體的粗脂肪含量和飼料表觀消化率(P＜0.05)，并造成了牙鲆后腸組織的病理性變化。通過分析認為，如果飼料中大豆異黃酮的含量不超過0.4％，它對牙鲆的抗營養(yǎng)作用不明顯。由于一般大豆制品中大豆異黃酮的含量在0.1～0.3％，因此本文建議在使用大豆

7、制品來替代魚粉飼喂牙鲆時可以不用考慮大豆異黃酮的抗營養(yǎng)作用。 (3)通過分離和原代培養(yǎng)牙鲆腸道上皮細胞，并以其為細胞模型，研究大豆中三種熱穩(wěn)定性抗營養(yǎng)因子對其形態(tài)、存活率、增殖、膜完整性和功能的影響。本實驗研究的三種抗營養(yǎng)因子為大豆皂甙、植酸和棉子糖，其在培養(yǎng)液中的濃度分別為2、4和8 g L-1。結果表明：與其他三個處理組相比(對照、植酸和棉子糖)，在培養(yǎng)液中添加2 g L-1的大豆皂甙顯著抑制牙鲆腸道上皮細胞的存活、增殖和細

8、胞堿性磷酸酶活力(P＜0.001)，并嚴重破壞了牙鲆腸上皮細胞細胞膜的完整性，改變了細胞的形態(tài)結構；與對照組相比，在培養(yǎng)液中添加4 g L-1的植酸顯著改變牙鲆腸上皮細胞的形態(tài)結構，并抑制細胞的存活、增殖、細胞膜完整性和細胞堿性磷酸酶活力(P＜0.05)；與對照組相比，在培養(yǎng)液中添加8 g L-1的棉子糖對牙鲆腸道上皮細胞的形態(tài)結構、存活、增殖、細胞膜完整性和細胞堿性磷酸酶活力均沒有顯著影響(P＞0.05)。本實驗添加的濃度參考了這三種

9、抗營養(yǎng)因子在一般大豆制品中的含量，也是當牙鲆攝食含有50％豆粕的飼料后它的腸上皮細胞所在環(huán)境的抗營養(yǎng)因子含量，比其他以細胞為研究模型的報道要高。通過分析認為，在使用大豆制品來替代魚粉飼喂牙鲆時應重視大豆皂甙和植酸對魚類腸道的損害作用，并設法去除，不過可以不用考慮棉子糖的抗營養(yǎng)作用。 (4)以魚粉和豆粕為蛋白源，配制了4種等氮等能的實驗飼料(粗蛋白50.0％，總能20.5 KJ/g)。采用長時間胃內灌喂法(被動攝食)投喂牙鲆(60

10、.0±0.66 g)，在攝食量相同的情況下，研究以魚粉為蛋白源的飼料中添加多種抗營養(yǎng)因子(0.2％大豆胰蛋白酶抑制因子、0.2％大豆皂甙、0.2％大豆異黃酮、0.4％植酸鈉和0.5％棉子糖)和以45％豆粕替代魚粉為蛋白源的飼料中添加晶體氨基酸(0.75％蛋氨酸和0.25％賴氨酸)對牙鲆生長、存活、飼料效率和表觀消化率的影響。實驗在室內循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行，每桶5尾魚，每個處理設置三個重復，每天人工灌喂飼料1次，每尾魚1ml(干重0.5

11、4 g)。研究結果表明：采用灌喂法養(yǎng)殖的牙鲆生長和存活狀況良好，對照組飼料效率達到1.22，且實驗期間沒有出現(xiàn)魚體死亡現(xiàn)象；在攝食量相同的情況下，用豆粕替代45％的魚粉顯著降低了牙鲆的體增重、飼料效率和表觀消化率(P＜0.05)，且平均體增重還不到魚粉組的一半(從15.68g到7.73g，P＜0.05)；在攝食量相同的情況下，飼料中添加多種抗營養(yǎng)因子在實驗開始的前四天顯著降低了牙鲆的體增重和飼料效率(P＜0.05)，但隨著實驗周期的延長

12、，在飼料中添加多種抗營養(yǎng)因子對牙鲆的體增重、飼料效率和表觀消化率均沒有顯著影響(P＞0.05)；在攝食量相同的情況下，與豆粕組相比較，在豆粕飼料中添加蛋氨酸和賴氨酸對牙鲆的體增重、飼料效率和表觀消化率均沒有顯著影響(P＞0.05)。通過分析認為，在用豆粕替代45％魚粉的實驗中，抗營養(yǎng)因子不是導致牙鲆生長下降的主要因素；在替代45％魚粉的豆粕飼料中添加蛋氨酸和賴氨酸并不能有效改變豆粕的替代效果；由于本實驗采用的是人工灌喂的投喂模式，不會存