端粒、端粒酶活性在氯化鑭誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、隨著稀土在醫(yī)藥、生物化學(xué)等領(lǐng)域研究的不斷深入，其在生命科學(xué)中的地位日益重要。許多研究表明，一定濃度稀土具有顯著的抗腫瘤作用。端粒酶是一種依賴RNA的逆轉(zhuǎn)錄酶，能夠延長染色體末端的端粒長度，端粒酶活化是細(xì)胞永生化和腫瘤形成的關(guān)鍵步驟，惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性升高，其中端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）是端粒酶催化亞單位，其轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)是端粒酶激活的關(guān)鍵步驟。雞馬立克氏病（MD）的許多特性與哺乳動物腫瘤的發(fā)生有相似之處，被作為研究腫瘤性疾病的良好模

2、型。本課題以馬立克氏病脾臟淋巴瘤繼代細(xì)胞系MDCC-MSB1（MSB1）為研究對象，在培養(yǎng)體系中加入3 mmol·L-1 LaCl3作用12h、24h、36h、48h，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、電子顯微鏡、原位末端標(biāo)記、DNA電泳分析、流式熒光原位雜交法、TRAP-PCR銀染法、實時定量PCR染料法等方法，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、DNA斷裂變化、細(xì)胞周期及細(xì)胞內(nèi)端粒長度變化、端粒酶活性以及chTERT mRNA表達(dá)水平等方面，探討端粒及端粒酶活性在La

3、Cl3誘導(dǎo)MDCC-MSB1腫瘤細(xì)胞凋亡中的作用，為臨床應(yīng)用LaCl3治療MD及其他腫瘤性疾病提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明：
　　 1. 倒置顯微鏡下觀察MDCC-MSB1細(xì)胞生長情況，HE染色、AO/EB雙熒光染色、透射電鏡觀察3 mmol·L-1 LaCl3作用不同時間下誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，結(jié)果表明LaCl3能誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞凋亡，且凋亡率具有時間依賴性；
　　 2. 應(yīng)用DNA La

4、dder、堿性SCGE、TUNEL法檢測LaCl3對MDCC-MSB1細(xì)胞DNA的損傷作用，結(jié)果證實LaCl3能夠引起MDCC-MSB1細(xì)胞DNA損傷，且呈時間-效應(yīng)關(guān)系。提示LaCl3致DNA損傷是其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一；
　　 3. 應(yīng)用PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化，結(jié)果表明LaCl3誘導(dǎo)MDCC-MSB1細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，而抑制其增殖，且抑制率具有時間依賴性；
　　 4. 應(yīng)用Flow-Fish法檢測

5、細(xì)胞內(nèi)端粒長度，TRAP-PCR銀染法檢測端粒酶活性，實時定量PCR染料法檢測chTERT mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示，LaCl3作用細(xì)胞不同時間后，細(xì)胞端粒酶活性下降，端粒長度縮短，chTERT mRNA表達(dá)減少，證實LaCl3可能通過端粒酶途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 綜上所述，在實驗濃度范圍內(nèi)，LaCl3可誘導(dǎo)MDCC-MSB1腫瘤細(xì)胞凋亡，呈明顯的時間-效應(yīng)關(guān)系。LaCl3可通過下調(diào)MDCC-MSB1細(xì)胞的chTERT mR