馬齒莧-魚腥草-益生菌聯(lián)用對熱毒證小鼠腹瀉的預防效果研究.pdf

1、畜禽腹瀉是危害養(yǎng)殖業(yè)的重要疾病之一。具有幾千年歷史的中醫(yī)藥是中國的瑰寶，在人和動物疫病防治中發(fā)揮了重要作用。中獸藥的天然性、低殘留性和低抗藥性是化學藥物所無法比擬的，是綠色健康養(yǎng)殖的必然發(fā)展趨勢;益生菌是一類對宿主有益的活性微生物，通常被用來治療與胃腸道相關的疾病。有資料表明，有些中藥與益生菌聯(lián)用治療腸道疾病效果優(yōu)于單獨使用中藥或益生菌。為此，本研究嘗試將具有清熱解毒作用的中藥馬齒莧、魚腥草分別與益生菌聯(lián)合應用預防動物腹瀉性疾病，為中藥

2、與益生菌聯(lián)用技術提供有益探索。
　　本研究以小鼠為實驗動物，馬齒莧、魚腥草為試驗藥物，56株益生菌為受試菌株，進行以下幾個方面的試驗:(1)益生菌篩選。通過體外試驗篩選出可以耐受人工胃腸液、抑制產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌、并且能夠在馬齒莧或魚腥草水提液中生長的益生菌。(2)動物試驗。首先制備含藥飼料，即將1、2.5、5g/kg三個劑量的馬齒莧、魚腥草分別添加到小鼠基礎日糧中，制備與正常小鼠飼料形態(tài)相同含藥顆粒飼料;然后進行試驗動物的分組及

3、處理。將240只昆明種雄性小鼠隨機分為15組，包括不同劑量馬齒莧(1、2.5、5g/kg)組、不同劑量馬齒莧(1、2.5、5g/kg)+益生菌組、不同劑量魚腥草(1、2.5、5g/kg)組、不同劑量魚腥草(1、2.5、5g/kg)+益生菌組、益生菌組、模型組、空白組。其中各組益生菌濃度均為1.0×108CFU/mL,灌胃劑量0.2mL/10g體重，1次/d。試驗期間，空白組小鼠給予普通飼料，其它組小鼠喂飼相應含藥飼料或灌胃益生菌。(3)

4、構建小鼠腹瀉模型。試驗組小鼠連續(xù)飼喂含藥飼料或灌胃益生菌10d后，以0.28mL/10g體重的劑量灌胃的干姜水提液(0.5g/mL)，1次/d，連續(xù)10d;再以0.2mL/10g體重的劑量腹腔注射7.5×107CFU/mL的產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)，1次/d，連續(xù)3d。(4)試驗觀察與檢測。試驗期間記錄小鼠精神、體重及腹瀉發(fā)生情況，試驗結束時采集血液進行生化檢查，采集腸道組織進行病理學檢查及組織TNF-α、IL-1β、IL-6、IL

5、-10、TGF-β1、IFN-γ等炎癥因子表達情況檢查。具體試驗結果如下:
　　(1)益生菌篩選從56株益生菌中篩選出了7株能夠耐受人工胃腸液環(huán)境的益生菌，分別為3株酵母菌、2株乳酸菌、2株枯草芽孢桿菌;通過馬齒莧、魚腥草對益生菌的協(xié)同實驗以及益生菌對ETEC的抑制實驗，進一步從上述7株益生菌中篩選出3株能在馬齒莧、魚腥草水提液中生長良好且能抑制ETEC生長的益生菌，分別為1株酵母菌、1株乳酸菌、1株枯草芽孢桿菌。
　　(2

6、)腹瀉率統(tǒng)計模型組小鼠在攻菌24h后的腹瀉率高達87.5％，遠遠高于其他用藥組;魚腥草各用藥組的腹瀉率普遍高于同等劑量的馬齒莧各用藥組;比較各馬齒莧用藥組發(fā)現(xiàn)，高劑量馬齒莧+益生菌組小鼠的腹瀉率最低(12.5％)。
　　(3)組織病理學檢查組織學檢查發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠小腸絨毛斷裂、部分壞死脫落、腸腺變形明顯，提示小鼠腹瀉模型建造成功。預防后，與模型組相比，不同劑量馬齒莧組、不同劑量馬齒莧+益生菌組以及益生菌組小鼠十二指腸病理變化有所

7、恢復，其中高劑量馬齒莧+益生菌組小鼠腸絨毛基本完整，腸道組織結構趨于正常。
　　(4)電解質指標測定與空白組相比，模型組小鼠血清中C1-顯著升高(P＜0.05)，Ca2+含量顯著降低(P＜0.05);與模型組相比，各用藥組小鼠均能在一定程度上恢復小鼠生理機能，其中高劑量馬齒莧+益生菌組的效果優(yōu)于其他用藥組。
　　(5)腸道炎癥因子檢測與空白組相比，模型組TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-6、TGF-β1、IFN-γ表

8、達均顯著升高(P＜0.05);與模型組比較發(fā)現(xiàn)，高劑量馬齒莧+益生菌組IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、IL-10的表達量均顯著降低(P＜0.05)。
　　結論:(1)ETEC配合干姜水提液誘導的小鼠腹瀉，可造成小鼠體內(nèi)電解質平衡失調和腸道損傷;(2)馬齒莧、魚腥草與益生菌聯(lián)合應用都能降低熱毒腹瀉小鼠的腹瀉率，其中馬齒莧-益生菌聯(lián)用的效果優(yōu)于魚腥草-益生菌聯(lián)用;(3)馬齒莧與益生菌聯(lián)合應用能恢復熱毒小鼠的