灰樹花不同菌株蛋白分析及其粗提物活性研究.pdf

1、灰樹花(Grifola frondosa)日本稱“舞茸”,是一種名貴的食、藥兩用菌，近年來作為高級(jí)保健食品，風(fēng)行北美和日本市場(chǎng)。其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，引起了人們的廣泛關(guān)注。
　　 本文以開發(fā)利用灰樹花中的活性蛋白成分為出發(fā)點(diǎn)，主要進(jìn)行了灰樹花蛋白高產(chǎn)培養(yǎng)基的篩選、不同灰樹花菌株的品種比較試驗(yàn)和灰樹花發(fā)酵液蛋白含量變化情況的測(cè)定及其提取，以及蛋白粗提物的活性檢測(cè)和氨基酸分析。得出以下結(jié)論:
　　 1.灰樹花蛋白高產(chǎn)培養(yǎng)基

2、的篩選
　　 通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，測(cè)定了不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲平均生長(zhǎng)量的影響，以及菌球蛋白含量、醇沉物和醇溶物蛋白含量，結(jié)果表明:適合灰樹花培養(yǎng)提取蛋白的優(yōu)化培養(yǎng)基碳、氮源為地瓜淀粉1％，葡萄糖1％，酵母粉0.5％，酵母膏0.5％。
　　 2.不同灰樹花菌株的品種比較試驗(yàn)
　　 通過灰樹花8個(gè)菌株的比較試驗(yàn)，從平均生長(zhǎng)量、日均生長(zhǎng)量來看，238菌株的二項(xiàng)指標(biāo)在8個(gè)菌株中均最大且差異顯著。
　　 在液體發(fā)

3、酵實(shí)驗(yàn)中，238菌株在蛋白質(zhì)生產(chǎn)高峰期所產(chǎn)蛋白質(zhì)的量最大，依次為226、216、270、265、253、251、275菌株。
　　 3.灰樹花發(fā)酵液蛋白提取時(shí)間的研究
　　 通過對(duì)8個(gè)灰樹花菌株的培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在接種后的前6天，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，生長(zhǎng)過程中需要消耗一定的氮素營(yíng)養(yǎng)，因此發(fā)酵液中的蛋白持續(xù)下降;在培養(yǎng)的第7天由于次級(jí)代謝物的產(chǎn)生，使發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)含量增加;在培養(yǎng)的第8天，由于新菌絲生長(zhǎng)，吸收發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，又使

4、發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)含量呈下降趨勢(shì);在第9天灰樹花基本處于生長(zhǎng)的平衡期，產(chǎn)生和利用的蛋白基本保持平衡。因此，液體培養(yǎng)的第7天是進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取的最佳時(shí)間。
　　 4.灰樹花蛋白粗提物的活性檢測(cè)及其氨基酸分析
　　 通過不同樣品對(duì)化療藥物處理過正常組織來源的HL-7702人肝細(xì)胞的恢復(fù)作用研究發(fā)現(xiàn)，在所有的樣品中，對(duì)化療藥物處理過的恢復(fù)作用最高的是238菌株酸性條件下的醇沉樣品C1，其恢復(fù)率為579.62％;238菌株發(fā)酵液硫

5、酸銨沉淀物GFP，其恢復(fù)率為556.85％，;226菌株酸性條件下的醇溶樣品B4，其恢復(fù)率為504.61％。其余的樣品對(duì)化療藥物處理過的正常組織來源的HL-7702人肝細(xì)胞都有一定的恢復(fù)作用。
　　 通過對(duì)灰樹花8個(gè)品種的不同樣品的氨基酸分析，發(fā)現(xiàn)238菌株酸性醇沉物C1樣品中必需氨基酸的含量為35.05％，支鏈氨基酸的含量為19.92％，芳香族氨基酸的含量為6.67％;238菌株發(fā)酵液硫酸銨沉淀物GFP中必需氨基酸的含量為29

6、.63％，支鏈氨基酸的含量為14.73％，芳香族氨基酸的含量為7.59％;226菌株酸性條件下的醇溶物B4中必需氨基酸的含量為25.41％，支鏈氨基酸的含量為15.91％，芳香族氨基酸的含量為5.12％。樣品C1中氨基酸含量最高的為天門冬氨酸，占總氨基酸含量的11.09％，其次是甘氨酸和谷氨酸，含量分別為10.88％和10.40％;樣品GFP中氨基酸含量最高的是甘氨酸，占總氨基酸含量的15.64％，其次是天門冬氨酸和谷氨酸，含量分別為1