PRRSV高變異株與美洲標(biāo)準(zhǔn)株VR-2332NSP2蛋白的表達(dá)與免疫原性鑒定.pdf

1、PRRS是在20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)的一種動(dòng)物傳染病，此病每年給世界養(yǎng)豬業(yè)造成的損失達(dá)幾十億美元，間接損失難以計(jì)算。由于不同PRRSV分離株核苷酸序列存在廣泛而明顯的變異，給PRRS的準(zhǔn)確檢測和有效控制帶來困難。本研究目的為通過分離和鑒定一株高變異PRRSV野毒株，構(gòu)建和表達(dá)變異株和美洲標(biāo)準(zhǔn)株NSP2蛋白，建立ELISA方法用于區(qū)分滅活苗免疫豬與自然感染豬，為有效防控PRRSV，合理制定免疫程序提供依據(jù)。 根據(jù)GenBank發(fā)表的P

2、RRSVVR-2332毒株的基因序列，本研究針對(duì)NSP2基因設(shè)計(jì)了二對(duì)引物，利用RT-PCR方法，成功擴(kuò)增出本實(shí)驗(yàn)室分離的PRRSV TA-12毒株的NSP2全基因。利用DNAStar軟件分析NSP2蛋白的抗原表位，將NSP2基因共劃分四個(gè)片段，按N端保守區(qū)劃分兩個(gè)片段，中間高變區(qū)為一個(gè)片段，C端保守區(qū)為一個(gè)片段，設(shè)計(jì)了四對(duì)帶有酶切位點(diǎn)的引物，分別構(gòu)建了重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株BL21plys中，對(duì)重組菌進(jìn)行誘導(dǎo)后，經(jīng)過Wes

3、tern blot鑒定，結(jié)果顯示外源蛋白在宿主菌中有表達(dá)。同時(shí)使用擴(kuò)增TA-12NSP2高變區(qū)的引物RT-PCR擴(kuò)增得到美洲標(biāo)準(zhǔn)株VR-2332 NSP2的對(duì)應(yīng)基因片段，成功在宿主菌中表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步選擇TA-12N端保守區(qū)，高變區(qū)純化的重組蛋白為抗原，建立ELISA方法檢測本實(shí)驗(yàn)收集的400份豬血清。ELISA結(jié)果顯示PRRSV NSP2基因的中間區(qū)域突變株TA-12和美洲標(biāo)準(zhǔn)株的抗原表位具有不同的免疫原性，推測可以利用NSP2蛋白