海洋多糖藥物PS916的熒光標(biāo)記及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、海洋硫酸多糖PS916是以來(lái)源于海洋的甲殼質(zhì)為基礎(chǔ)原料，經(jīng)多步分子修飾而得到的一種硫酸氨基多糖，化學(xué)名為β-(1，4)-3-氧-硫酸基-6-氧-硫酸基-6′-氧.羧甲基醚鈉鹽，英文名為β-(1，4)polyglycosamine-3-O-sulfate-6-O-sulfate-6′-O-carboxylmethyl ether sodium，藥效學(xué)研究結(jié)果表明PS916具有調(diào)血脂、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖等作用，具有多途徑抗

2、動(dòng)脈粥樣硬化作用，系正在進(jìn)行系統(tǒng)研究的I類新藥。本文對(duì)PS916在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)、組織分布及排泄進(jìn)行了研究，初步闡明了PS916在大鼠體內(nèi)的吸收，分布及排泄過(guò)程，為新藥開發(fā)和臨床用藥提供了一定的理論依據(jù)。本論文主要研究工作如下： 一、PS916的熒光標(biāo)記研究PS916為多糖類物質(zhì)，在分子結(jié)構(gòu)中缺乏發(fā)色團(tuán)和熒光團(tuán)，不能直接用紫外或熒光法進(jìn)行檢測(cè)，質(zhì)譜法也不適合多糖的定量分析。因此，我們以異硫氰酸熒光素(FITC)為熒光標(biāo)記試

3、劑，對(duì)PS916進(jìn)行了熒光標(biāo)記，標(biāo)記后的PS916的熒光最大激發(fā)波長(zhǎng)Ex為480nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)Em為515nm；熒光標(biāo)記的PS916中含F(xiàn)ITC 0.74％；以高效凝膠色譜法測(cè)定PS916分子量及分子量分布，測(cè)定結(jié)果表明，標(biāo)記后的PS916平均分子量及分子量分布寬度與標(biāo)記前比較均未發(fā)生顯著變化。 二、 PS916的體內(nèi)外穩(wěn)定性研究以熒光標(biāo)記的PS916為研究對(duì)象，采用高效凝膠色譜法考察PS916在磷酸鹽緩沖液(PBS)及大鼠

4、血漿中的穩(wěn)定性。PS916體外在PBS、大鼠血漿及大鼠尿液中37℃孵育1h、20h，其分子量及分子量分布寬度均未發(fā)生變化，熒光強(qiáng)度也未發(fā)生變化，表明PS916體外在PBS、大鼠血漿及大鼠尿液中穩(wěn)定。同時(shí)，對(duì)大鼠以口服和靜脈注射兩種給藥方式給藥后PS916在血漿、尿液和糞便中的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，體內(nèi)大鼠口服PS916后血漿和糞便中PS916均以原型形式存在；PS916靜脈注射給藥后尿液中以原型形式從尿液中排泄，說(shuō)明大鼠口服和靜脈注射PS9

5、16后，主要以原型的形式吸收代謝。 三、PS916在生物樣品中的定量分析方法研究建立了生物樣品中PS916的熒光定量分析方法，PS916的血漿濃度在0.2-20μg/mL的濃度范圍內(nèi)PS916的熒光強(qiáng)度與濃度具有良好的線性關(guān)系，線性方程為：y=22.951x-3.3561，相關(guān)系數(shù)r2=0.999l，血漿中PS916最低定量限為0.2μg/mL：低、中、高(0.2、2.0、20.0μg/mL)3種濃度的日內(nèi)精密度在1.52-7.

6、83％之間，日間精密度在2.14-8.42％之間，組內(nèi)回收率在84.3-108.0％之間，組間回收率在88.7-100.1％之間；血漿樣品穩(wěn)定性考察顯示PS916在-70℃條件下放置4周相對(duì)穩(wěn)定。PS916在組織、尿液及糞便中的線性、精密度、準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性分析均符合生物樣品體內(nèi)定量分析的要求。證明本實(shí)驗(yàn)方法適用于PS916在大鼠血漿、組織等生物樣品中含量的測(cè)定。 四、PS916在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究1、大鼠口服和靜脈給藥PS

7、916后，血藥濃度一時(shí)間曲線數(shù)據(jù)采用非房室模型計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，通過(guò)Cmax和/AUC與給藥劑量的相關(guān)性分析結(jié)果表明，大鼠口服和靜脈給藥后，PS916在大鼠體內(nèi)呈線性動(dòng)力學(xué)特征。 2、大鼠口服PS916后，三種劑量的平均Tmax為3.28±0.58h，可知。PS916在大鼠體內(nèi)吸收較慢，達(dá)峰遲緩。大鼠口服三種劑量下平均消除半衰期t1/2為7.84±0.12h，大鼠靜脈注射三種劑量下平均消除半衰期t1/2為8.74±1.01h，

8、口服和靜脈給藥后的t1/2無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，PS916在大鼠體內(nèi)的半衰期較長(zhǎng)，3、大鼠口服和靜脈給藥后，用AUC0-∞計(jì)算PS916絕對(duì)生物利用度為9.06％，顯示大鼠口服PS916吸收較差，生物利用度較低。 4、在大鼠連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)中，口服50mg/kg劑量PS916多次給藥與單次給藥相比，藥.時(shí)曲線基本吻合，首、末次給藥后的t1/2和AUC0-∞值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示PS916多次給藥體內(nèi)不易蓄積，且對(duì)其代謝酶無(wú)誘

9、導(dǎo)抑制作用。 5、大鼠單次口服PS916后，組織分布實(shí)驗(yàn)表明，給藥后1h，藥物能分布到大部分組織中，在腸和胃中分布最高，另外主要分布在血流充足的肝和肺組織；給藥6h后，腸和胃組織中藥物濃度明顯下降，腎臟中藥物濃度明顯升高，表明PS916吸收入血后的藥物主要經(jīng)腎臟隨尿液排出；給藥24h后，大部分組織中藥物濃度均明顯降低。給藥后腦組織中可檢測(cè)到藥物，說(shuō)明：PS916能透過(guò)血腦屏障，向腦內(nèi)分布。 6、大鼠單次靜脈給予PS916

10、后，組織分布實(shí)驗(yàn)表明，PS916靜脈給藥后在大鼠各主要組織中廣泛分布。給藥后1h，PS916在大鼠腎臟、肝臟、血漿中的濃度較高，在腎臟中濃度最高，在腸中亦有相對(duì)較高濃度，在腎臟中含量高說(shuō)明該藥物主要經(jīng)腎排泄。PS916靜脈注射6h后，腎臟中藥物濃度在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)中最高，在腎臟、肝臟、腸、心、肺、胃、脾等組織中的濃度均大于其血漿濃度，說(shuō)明、PS916的組織分布比例較大。給藥后PS916在腦中亦可檢出，說(shuō)明PS916能透過(guò)血腦屏障，向腦內(nèi)分布

11、。 7、大鼠口服給予PS91.6后，主要以原型從糞便和尿液中排出體外，給藥72h后，尿中PS916的累積排泄量占給藥劑量百分比為1.288±0.958％～糞中PS916的累積排泄量占給藥劑量百分比為78.974±5.498％；灌胃給藥后72h內(nèi)，有相當(dāng)于給藥量80.26％的藥物以原型的形式隨尿糞排出體外，灌胃給藥后PS916主要是從糞便中排出。 8、大鼠靜脈注射給予PS916后，主要以原型從糞便和尿液中排出體外，給藥72