高效辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建及其在辣椒功能基因組研究中的運(yùn)用.pdf

1、試驗(yàn)首先建立辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化體系，再用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從辣椒中分離獲得的CaWRKY2，CaWRKY3，CaWRKY4，CaWRKY5，CaDREB，CaNAC，CaI1基因所構(gòu)建的干擾載體對(duì)辣椒普通栽培種P009，P020，P120，P121辣椒品種進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了抗性再生植株，并對(duì)所獲得的轉(zhuǎn)基因苗進(jìn)行了初步的RT-PCR分子鑒定及抗病性分析，目的是為進(jìn)一步進(jìn)行CaWRKY家族基因以及其他基因功能分析以及抗病機(jī)制研究提供研究材料，并

2、為辣椒建立了一個(gè)高效穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為進(jìn)一步開(kāi)展辣椒基因工程遺傳改良和辣椒功能基因組學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。試驗(yàn)主要結(jié)果如下： (1)選取辣椒品種P009，P020，P120，P121進(jìn)行辣椒離體再生體系優(yōu)化。試驗(yàn)得出最適小苗苗齡為8-15d，最佳外植體為去頂芽莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，最佳培養(yǎng)基為MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+蔗糖30g，pH5.8。 (2)P009，P020，P

3、120，P121去頂芽莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，帶柄子葉經(jīng)過(guò)預(yù)培養(yǎng)，與農(nóng)桿菌的共培養(yǎng)，篩選培養(yǎng)，伸長(zhǎng)培養(yǎng)，生根培養(yǎng)獲得離體再生轉(zhuǎn)基因苗。預(yù)培養(yǎng)與共培養(yǎng)培養(yǎng)基為MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+100 mg/L AS+蔗糖30g，pH5.8；誘導(dǎo)篩選培養(yǎng)基MS+5.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA+4.0 mg/L AgNO3+70 mg/L Kan+500 mg/L Cb+蔗糖30g，p

4、H5.8；伸長(zhǎng)培養(yǎng)基MS+2.0mg/L6-BA+0.2 mg/L IAA+1.0 mg/L GA3+4.0 mg/L AgNO3+70 mg/L Kan+500 mg/L Cb+蔗糖30g，pH5.8；生根培養(yǎng)基1/2 MS+200 mg/LCef+蔗糖30g.pH5.8。 (3)EHA105根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的辣椒遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件是：外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)1-3d，農(nóng)桿菌共培養(yǎng)前在含50mg/L Rif，Spec和100m

5、g/L AS兩次活化，侵染OD600值為0.3-0.6，侵染10 min，25℃、黑暗條件下共培養(yǎng)2-3 d。 (4)獲得了17株P(guān)009轉(zhuǎn)iCaDREB轉(zhuǎn)化植株；5株P(guān)020轉(zhuǎn)iCaWRKY4轉(zhuǎn)化植株；21株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaWRKY2轉(zhuǎn)化植株；2株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaWRKY3轉(zhuǎn)化植株；15株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaWRKY4轉(zhuǎn)化植株；12株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaWRKY5轉(zhuǎn)化植株；9株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaI1轉(zhuǎn)化植株；9株P(guān)120轉(zhuǎn)iCaNAC轉(zhuǎn)