中國葡萄屬野生種抗黑痘病基因RAPD標記作圖.pdf

1、該研究以中國野生葡萄和歐洲葡萄種間雜交組合88-110(83-4-96×粉紅玫瑰)的雙親及F<,1>代群體為試材,在田間人工接種鑒定的基礎上,對雙親及F<,1>代進行RAPD分析,依據(jù)RAPD分析結(jié)果,進行抗黑痘病基因的RAPD標記作圖.同時對獲得的特殊RAPD標記S353-1400進行測序及酶切分析,取得的主要結(jié)果如下:1.采用田間人工接種黑痘病病原菌的方法,研究了中國野生葡萄和歐洲葡萄種間雜交組合88-110(83-4-96×粉紅玫

2、瑰)F<,1>群體對黑痘病的抗性.結(jié)果表明,44株F<,1>代中,抗黑痘病的為20株,感病的為24株,經(jīng)卡平方檢測(X<'2>=0.2045*),符合1:1比例分離.88-110組合F<,1>代,44株中有41株的感病指數(shù)在雙親之間分布,占93.18%.2.以88-110組合親本83-4-96和粉紅玫瑰為模板,444個10bp隨機引物有341個引物能在雙親間擴增出差異條帶;然后用341個隨機引物對葡萄黑痘病的抗性材料混合池和感病材料混合

3、池為模板進行擴增,擴增出符合1:1或3:1比例的RAPD標記用于構(gòu)建遺傳連鎖圖譜研究.利用Mapmaker/Exp3.0軟件,在LOD=3.0設置下,24個標記可形成一個連鎖群,共覆蓋469.3cM,位點間平均距離19.55cM,最小距離5.9cM,最大距離為36.4cM,與抗黑痘病基因最近的標記為S353-1400(5.9cM).3.將S353-1400用回收試劑盒回收,連接T載體并克隆,篩選、鑒定重組克隆.對重組質(zhì)粒抽提、純化和測序

4、.測序結(jié)果為S353-1400序列的實際長度是1371bp.4.用Wingene231DNA分析軟件對S353-1400序列的限制性內(nèi)切酶位點進行了分析,有141個(可識別6個及其以上序列堿基位點)限制性內(nèi)切酶在S353-1400序列上存在酶切位點,并且在1147bp處有一EcoRI酶切位點.5.在GenBank中對S353-1400的DNA序列進行了相似性分析,表明序列與其它生物體序列同源性較小,為中國野生葡萄基因組所特有.S353-