雞新城疫病毒單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、本研究利用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，經(jīng)細(xì)胞融合、篩選和克隆化，建立了一株能穩(wěn)定分泌抗新城疫病毒（NDV）的單克隆抗體（McAb）雜交瘤細(xì)胞株，并對其分泌的單克隆抗體（McAb）進(jìn)行了初步鑒定。試驗采用雞胚尿囊腔接種病毒的方法繁殖NDV，差速離心法對NDV進(jìn)行純化，用純化的NDV做為抗原，與弗氏佐劑充分乳化后，免疫Balb/C小鼠。取免疫小鼠的脾細(xì)胞與NSO漿細(xì)胞瘤細(xì)胞，在聚乙二醇（PEG-1500）作用下進(jìn)行細(xì)胞融合，用間接ELISA和血凝抑

2、制試驗（HI）進(jìn)行陽性雜交瘤的篩選，挑選效價高的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋法克隆和亞克隆，建立陽性雜交瘤細(xì)胞株，最終得到一株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為4F12。采用體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)誘生腹水的方法制備了其McAb。對獲得的單克隆抗體采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA），血凝抑制實驗（HI），Western-blotting方法進(jìn)行鑒定。雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水的ELISA效價分別為1：160和l：3．2×104。獲得的單克隆抗體與NDV