生防制劑在葡萄保鮮中的應(yīng)用與抑菌機理研究.pdf

1、葡萄(Vitis vinifera L．)采后微生物病害會導(dǎo)致巨大經(jīng)濟損失，以往葡萄果實采后病害的防治主要采用硫處理的方法，但長期大量使用化學(xué)殺菌劑會使致病菌產(chǎn)生抗藥性，同時會對人體健康及環(huán)境造成危害，因此迫切需要尋找一種有效而無害的防治方法。以有效微生物取代化學(xué)殺菌劑用于果蔬采后病害的防治己顯示出巨大的應(yīng)用前景，并成為一個新的研究熱點。研究微生物殺菌劑取代化學(xué)殺菌劑進行葡萄果實采后病害的防治，對于減少葡萄果實中硫的殘留，保護環(huán)境，保證

2、食用安全性具有重要意義。 本研究從已篩選出的對葡萄果實采后病害具有拮抗作用的酵母菌中，選擇抑菌效果最好的菌種制備生防制劑。對比了不同拮抗酵母抑制灰霉葡萄孢的效果以及在葡萄果實表面的生長性能。探討了拮抗酵母的抑菌機理，研究了拮抗酵母制劑的制備方法，并摸索了提高生防制劑對葡萄果實采后病害抑制效果的措施。主要研究結(jié)果如下： 1．通過invivo試驗發(fā)現(xiàn)：在所選的拮抗酵母中，季也蒙畢赤氏酵母抑制灰霉葡萄孢的效果最好，腐爛率為空白

3、對照的18％左右，并且可以在新鮮葡萄果實表面快速生長，具備開發(fā)成葡萄生防制劑的潛力。 2．通過混菌培養(yǎng)、對比拮抗酵母各處理液抑菌效果以及檢測酵母無營養(yǎng)培養(yǎng)基中β-1，3葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶的活性情況證實：季也蒙畢赤氏酵母并非通過分泌抑菌物質(zhì)來發(fā)揮抑制致病菌的作用，而是通過營養(yǎng)與空間競爭來抑制灰霉葡萄孢。 3．普通光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：季也蒙畢赤氏酵母能夠吸附在灰霉葡萄孢的菌絲體上，但季也蒙畢赤氏酵母培養(yǎng)濾液中不含抑

4、菌成分，季也蒙畢赤氏酵母與灰霉葡萄孢的無營養(yǎng)培養(yǎng)液中沒有檢測出幾丁質(zhì)酶和β-1，3葡聚糖酶活性。上述結(jié)果均不支持重寄生的判斷，從現(xiàn)有研究中尚未能證實季也蒙畢赤氏酵母與灰霉葡萄孢間存在寄生關(guān)系。 4．通過在葡萄果實上接種微生物，觀察葡萄果實中抗病酶系(幾丁質(zhì)酶和β-1，3葡聚糖酶)的活性變化規(guī)律，研究拮抗酵母菌對果實抗病性的誘導(dǎo)作用，結(jié)果表明：拮抗酵母未能顯著提高葡萄果實抗病性酶系的活性，誘導(dǎo)果實抗性也并非季也蒙畢赤氏酵母抑制灰霉

5、葡萄孢生長的方式。 5.通過營養(yǎng)源單因素篩選，結(jié)合培養(yǎng)基正交試驗發(fā)現(xiàn)：在PDB培養(yǎng)基中加入果糖18g/L，酵母膏2.0g.L，尿素2.0g/L，L-D-L-亮氨酸0.2g/L，KH<,2>PO<,4>5.5g/L，MnSO<,4>4.5mg/L，ZnSO<,4> 25 mg/L，煙酰胺0.4mg/L，肌醇120mg/L對季也蒙畢赤氏酵母進行增值培養(yǎng)，可以使酵母增值明顯高于普通PD8培養(yǎng)液，該配方可作為生產(chǎn)培養(yǎng)液配方。 6

6、.選擇接種量、培養(yǎng)時間、通風量、攪拌速度作為影響因素在小型發(fā)酵罐中進行中試發(fā)酵試驗，結(jié)果表明：采用培養(yǎng)溫度28℃、初始pH 4.0，接種量6％、培養(yǎng)時間30h，通風量2.0 V.V.m(m<'3>空氣/m<'3>發(fā)酵液·min)，攪拌速度100rpm的發(fā)酵工藝對季也蒙畢赤氏酵母進行增值培養(yǎng)，鮮酵母產(chǎn)量最高。 7.選擇活性干酵母常用保護劑和載體，生產(chǎn)季也蒙畢赤氏酵母干粉，通過測定一定貯藏期內(nèi)干粉中酵母的存活率，確定最佳保護劑和載體

7、。結(jié)果表明：選用山梨醇2％+蔗糖酯4％+PG 0.45％作為季也蒙畢赤氏酵母保護劑，奶粉作為載體制備酵母干粉制劑，可以使酵母菌存活率最高。 8.采用熱風干燥、真空干燥、微波干燥、離心噴霧干燥、冷凍升華干燥等工藝生產(chǎn)酵母干粉，對比干燥后酵母的存活率后發(fā)現(xiàn)：冷凍升華干燥可以使酵母干燥后達到91.6％的存活率，最有利保持酵母制劑活性。 9.通過測定酵母干粉在貯藏期中所含酵母的存活率，發(fā)現(xiàn)采用本研究中選取的培養(yǎng)液、發(fā)酵工藝和干粉

8、制備方法制得的活性干酵母制劑具有1年以上的有效期，將其應(yīng)用于葡萄果實的貯藏，結(jié)果表明：單獨使用該制劑，在使用濃度為1％，冷藏三個月后，可使葡萄果實腐爛率下降18％。 10.將各種提高葡萄果實抗病性的措施與拮抗菌結(jié)合，在葡萄果實上進行invivo試驗，結(jié)果表明：NaHCO<,3>、CaCl<,2>處理，微波處理、熱激處理、涂被、水楊酸(SA)誘導(dǎo)等措施均不能顯著提高季也蒙畢赤氏酵母的抑菌能力，而低劑量的化學(xué)防腐劑，能夠顯著提高酵母