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文檔簡介
1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇毒素(DON)又稱為嘔吐毒素,廣泛存在于大自然中,能夠對谷物和飼料帶來嚴重污染,是一種全球性的污染毒素。目前,生物降解法被認定為是降解DON的最佳方法?;谝陨纤?本文篩選出一株產DON降解酶的菌株,對其進行了形態(tài)和分子生物學鑒定,純化了DON降解酶并對其進行分析鑒定和相關性質研究,用純化的降解酶作用于DON對其降解效果和降解產物進行分析研究。研究結果如下:
(1)從土壤中分離的53個單菌落和15個供試菌種
2、中初篩得到3株菌種B-1、F-1和F-2,經過復篩發(fā)現菌株F-1胞內液的酶活力高達56.5,表明該降解酶為一種胞內酶。
(2)對菌株F-1進行形態(tài)鑒定和ITS鑒定,將擴增的目的基因與Genbank數據庫(NCBI)進行Blast序列對比,鑒定結果顯示菌株F-1與多株黑曲霉同源性均達到99%,表明菌株F-1是一株黑曲霉。
(3)對菌株F-1中的降解酶進行分離純化,SDS-PAGE電泳結果為單一條帶,說明得到較純的降解酶
3、,其純化倍數為42.6,回收率達到26.2%。
(4)液相質譜(1D-LC-MS)分析鑒定結果顯示該降解酶的含354個氨基酸,分子量為40.5kDa,等電點為6.01,測得的氨基酸序列與NIBC的數據庫中的蛋白YALI0A01441p高度匹配,表明該降解酶為一種脂肪酶。
(5)降解酶的性質研究發(fā)現,酶的最適反應溫度和最適 pH分別為40℃和8.5,Ca2+、Mg2+(1.0mM)和Fe2+能夠進一步激活酶的活性,Zn
4、2+和Cu2+則是很強的酶活抑制劑。有機溶劑對酶活力的影響降序排列順序為:甲醇>乙醇>DMSO>EDTA>丙酮。
(6)高效液相色譜(HPLC)檢測結果表明,DON被脂肪酶降解,其降解率達70%以上。薄層色譜(TLC)檢測結果顯示,在365nm紫外燈的照射下,可見DON的降解產物的白色亮斑,其Rf值為0.28。
(7)液相質譜(LC-MS)對DON的降解產物分析結果顯示, DON經過脂肪酶的降解,分子量從原來的296
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