養(yǎng)殖廢水中AmpCβ-內(nèi)酰胺酶類抗性基因遷移潛力研究.pdf

1、近年來(lái)，由于抗生素的濫用而造成的抗性基因污染問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，細(xì)菌形成抵御機(jī)制，同時(shí)也伴隨著抗生素在臨床治療上的失敗。耐藥基因在生境中發(fā)生水平轉(zhuǎn)移是致病菌獲得抗性的重要途徑，而水平轉(zhuǎn)移影響因素的研究對(duì)如何控制和削減抗性基因生態(tài)威脅提供科學(xué)依據(jù)。建立適宜、穩(wěn)定的細(xì)菌抗性基因接合轉(zhuǎn)移模型是研究抗生素與重金屬共脅迫影響細(xì)菌耐藥性水平轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵前提。綠色蛋白熒光標(biāo)記的質(zhì)粒以及選擇培養(yǎng)平板作為接合子篩選的條件，可快速有效的評(píng)估選擇壓力下耐藥基因轉(zhuǎn)移

2、情況。
　　選用養(yǎng)殖廢水提供復(fù)雜的群落細(xì)菌供體與致病菌大腸桿菌濾膜接合配對(duì)。為獲得穩(wěn)定可靠的接合轉(zhuǎn)移模型，濾膜接種量、洗膜稀釋倍數(shù)和洗膜時(shí)間作為三因素設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)。極差分析表明三種因素影響程度：洗膜時(shí)間：2min（主），濾膜平板上供體受體細(xì)菌接種量：20μL（次），洗膜稀釋倍數(shù)：10倍（?。?。濾膜配對(duì)時(shí)間也是抗性轉(zhuǎn)移的重要影響因素，考慮到抗生素的水解特性和接合子克隆性擴(kuò)增，接合時(shí)間設(shè)定為3h。四環(huán)素與頭孢噻肟鈉均在其1/2處最小抑

3、菌濃度時(shí)接合頻率達(dá)到最高。3h的接合時(shí)間未完全殺死細(xì)菌包括接合子，高濃度脅迫條件也檢測(cè)到接合轉(zhuǎn)移事件，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在非選擇壓力條件下耐藥基因轉(zhuǎn)移到受體菌。以3μg/L頭孢噻肟鈉為對(duì)照，其與重金屬共脅迫對(duì)接合子轉(zhuǎn)移事件的影響因重金屬種類和濃度而不同，在亞抑制濃度范圍均有峰值出現(xiàn)。重金屬汞、鋅、銅分別在1、1/2、1/4最小抑菌濃度處接合頻率達(dá)到最高，并且共脅迫條件表現(xiàn)出更強(qiáng)的促進(jìn)作用，且受到重金屬種類影響，其中汞的協(xié)同影響最大，其次為鋅，最

4、小為銅。
　　研究調(diào)查了共脅迫條件對(duì)接合子中七種常見的AmpCβ-內(nèi)酰胺酶類抗性基因（MOX，EBC，F(xiàn)OX，CIT，DHA，ACT，CMY）豐度變化的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重金屬共脅迫對(duì)接合子中幾種目標(biāo)ARGs相對(duì)豐度影響因種類而不同，且受銅、鋅濃度影響變化較大。汞在亞抑制濃度范圍隨濃度的升高對(duì)耐藥基因FOX的轉(zhuǎn)移有抑制作用。受銅共脅迫影響，耐藥基因EBC、FOX、CIT受濃度影響顯著，在80mg/L時(shí)銅共脅迫抑制作用最明顯。共脅迫鋅