B16-F10細(xì)胞中芳香烴受體對(duì)黑色素生成作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　空氣污染對(duì)健康的影響已成為近些年來(lái)一大研究熱點(diǎn)。大部分研究側(cè)重于其對(duì)呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響。然而皮膚作為人體最大的器官，也是機(jī)體與環(huán)境的交界面，空氣污染對(duì)皮膚的影響及其解決辦法卻研究甚少。本研究以此為出發(fā)點(diǎn)，重點(diǎn)研究當(dāng)環(huán)境污染物多環(huán)芳香烴(PAHs)和多鹵代芳香烴(PHAHs）存在時(shí)AhR在黑色素生成中的作用，并試圖削弱這種作用。
　　方法:
　　將2，3，7，8-四氯二苯并對(duì)二惡英(TCDD)、

2、苯并(a)芘、β-熊果苷和白藜蘆醇四種試劑分別或兩試劑混合后作用于B16-F10細(xì)胞。經(jīng)CCK-8實(shí)驗(yàn)確定試劑對(duì)細(xì)胞的毒性后，檢測(cè)各試劑對(duì)黑色素含量和酪氨酸酶活性的影響。并進(jìn)一步通過(guò)Real-time PCR和Western blot分析試劑對(duì)AhR基因和黑色素生成中酪氨酸酶家族基因表達(dá)的影響及試劑對(duì)AhR蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　CCK-8實(shí)驗(yàn):確定不同試劑的適宜濃度范圍，選用熊果苷20μg·mL-1，白藜蘆醇8μ

3、g·mL-1，苯并芘10μg·mL-1，TCDD50ng·mL-1用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　總黑色素含量與酪氨酸酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn):加入β-熊果苷、白藜蘆醇可有效降低由苯并芘、TCDD引起的黑色素含量與酪氨酸酶活性的增加。
　　Real-time PCR與Western blot實(shí)驗(yàn):β-熊果苷和白藜蘆醇可在一定程度上下調(diào)AhR、TYRP-1和TYRP-2的表達(dá)，苯并芘和TCDD與之相反。混合試劑對(duì)AhR轉(zhuǎn)錄水平的影響介于兩種純?cè)噭┲?/p>