產(chǎn)氣腸桿菌

1、第七章 腸桿菌科,第一節(jié) 概述 腸桿菌科包括24個與醫(yī)學(xué)有關(guān)的菌屬, G+Cmol％39-59。1. 四類引起人類腹瀉和腸道感染的細(xì)菌：埃 希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、耶爾森菌 屬。2. 八種與醫(yī)院感染有關(guān)的條件致病菌：枸櫞 酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、多源 菌屬、沙雷菌屬、變形桿菌屬、普羅威登 菌屬和摩根菌屬；,3. 其中鼠疫耶爾森菌、傷寒沙門菌對 人致病

2、性較強(qiáng)。此外，許多細(xì)菌既 是正常菌群，也是條件致病菌。在 機(jī)體抵抗力下降，寄居部位的改變 或菌群失調(diào)時能引起機(jī)會感染。,二、臨床意義 占臨床分離菌總數(shù)的50％和Ｇ-總數(shù)的 80％, 將近50％的敗血癥70％以上的泌尿 道感染和大量的腸道感染是由腸桿菌科 細(xì)菌引起的。 1. 人類腸道外感染 除志賀菌較少引起腸外 感染，大腸埃希菌、肺炎克雷

3、伯菌、產(chǎn) 酸克雷伯菌、奇異變形桿菌、產(chǎn)氣腸桿 菌、陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌等均可引 起泌尿道、呼吸道、傷口和中樞神經(jīng)系 統(tǒng)的感染;,且往往為醫(yī)院感染。鼠疫耶爾森菌可 引起烈性傳染病鼠疫。2. 人類腸道感染 埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶 爾森菌屬。主要引起各種急、慢性腸 道感染、食物中毒、旅行者腹瀉及腸 熱癥等。,三、共同特性 (1

4、) 1. 形態(tài)結(jié)構(gòu) Ｇ-桿狀或球桿狀、無芽孢、多數(shù)有鞭 毛，能運動。致病性菌株有菌毛。 2. 抗原成分 ⑴Ｏ抗原是細(xì)胞壁成分脂多糖。以核 心多糖為中心的三層結(jié)構(gòu)，內(nèi)側(cè)是脂類 A, 為內(nèi)毒素的毒性成分。外側(cè)是由重復(fù) 的特異多糖，決定Ｏ抗原的特異性。,⑵ H抗原是不耐熱的蛋白質(zhì)抗原，氨基酸 序列和空間構(gòu)型決定H抗原的

5、特異性。⑶ 表面抗原是包繞在Ｏ抗原外側(cè)的多糖抗 原，由多糖結(jié)構(gòu)決定抗原特異性。大腸 埃希菌稱K抗原、傷寒沙門菌稱Vi抗原 和志賀菌稱B抗原等。 O抗原和H抗原是腸桿菌科血清學(xué)分 群和分型的依據(jù)。表面抗原存在時可阻 斷?？乖c相應(yīng)抗體之間的反應(yīng)，加熱 處理能消除表面抗原的阻斷作用。,共同特性 (2) 3. 變異性 ⑴ S

6、-R變異是初次分離的細(xì)菌，菌體 抗原上都有特異性多糖鏈，菌落為光滑 型。在人工培養(yǎng)基中反復(fù)傳代時，細(xì)胞 壁上特異性多糖鏈消失而核心多糖仍保 留，菌落變?yōu)榇植谛汀?⑵H-O變異是有鞭毛的細(xì)菌, 失去鞭 毛，動力也隨之消失，稱H-O變異, 有 時見于新分離的菌株中。,4. 培養(yǎng)和生化特性 營養(yǎng)要求不

7、高，在普通培養(yǎng)基上生長 良好；兼性厭氧，主要生化特性包括發(fā) 酵葡萄糖(產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)，觸酶陽性, 氧化酶陰性，可將硝酸鹽還原至亞硝酸 鹽。5. 抵抗力 抵抗力不強(qiáng)，加熱60℃30min即被殺 死，不耐干燥，對一般化學(xué)消毒劑均敏 感。對低溫有耐受力。能耐膽鹽，能抵 抗染料的抑菌作用。,四、微生物檢驗 1. 標(biāo)本采集 ①

8、腸外標(biāo)本:采自不同的感染部位如血液 、體液、呼吸道、傷口、尿液及其他各 種標(biāo)本。 ② 腸道標(biāo)本:疾病早期留取新鮮糞便，挑 取粘液膿血部分進(jìn)行培養(yǎng)。應(yīng)在2h內(nèi)進(jìn) 行，以利志賀菌等檢出。如不能及時培 養(yǎng)應(yīng)冷藏待檢。 2. 直接鏡檢 Ｇ-桿菌，形態(tài)及染色性無鑒別

9、 意義。,3．分離培養(yǎng)鑒定 (1) 腸外標(biāo)本:采自無菌部位的標(biāo)本用血 瓊脂，血培養(yǎng)時可用肉湯增菌。其他 標(biāo)本中含有雜菌，需用選擇性培養(yǎng)基 以增加分離率，常用伊紅美藍(lán)(EMB) 瓊脂，因為EMB能促進(jìn)腸桿菌科細(xì) 菌生長并抑制其他Ｇ-菌。,(2) 腸道標(biāo)本：常用的選擇鑒別培養(yǎng)基(如EMB)和針對沙門菌和志賀菌的強(qiáng)選擇鑒別培養(yǎng)基

10、，(如SS瓊脂)。如疑耶爾森菌感染可用耶爾森菌選擇瓊脂(CIN)。,腸桿菌科細(xì)菌鑒定1) 常規(guī)生化鑒定:為實驗室最常用的方 法。各菌屬(種)主要生化特性有助 于鑒定細(xì)菌。2) 鑒定試劑盒:選用標(biāo)準(zhǔn)化和商品化的 微生物鑒定試劑盒，特點是質(zhì)量可 靠穩(wěn)定鑒定能力強(qiáng)，并與編碼技術(shù) 結(jié)合，可用儀器讀取結(jié)果，實現(xiàn)自 動化，并提高了工作效率。,3) 血清學(xué)鑒定：用特異性抗血清進(jìn) 行血

11、清學(xué)分型鑒定后才能作出最 終報告。4) 分子生物學(xué)鑒定：可鑒定至科、 屬 、種、血清型和腸毒素基因 等。甚 至可區(qū)分致病菌株和非 致病菌株。,耐藥性問題日趨嚴(yán)重。粘質(zhì)沙雷菌對青霉素G等抗生素天然耐藥，而大多數(shù)是形成的獲得性耐藥。有染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶或AmpC酶而產(chǎn)生的耐藥性。已出現(xiàn)了耐多種抗菌藥物的多重耐藥菌株，因此必須根據(jù)抗菌藥物敏感試驗選用抗生素，并作好耐藥性監(jiān)

12、控工作。同時細(xì)菌的耐藥譜還可成為醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查中的標(biāo)志。,(五) 抗菌藥物敏感試驗,一、分 類 埃希菌屬包括5個種： ① 大腸埃希菌是腸道中G-桿菌的主要 成員， 常引起腸內(nèi)外的感染，是腹 瀉和泌尿道感染的主要病原菌。 ② 蟑螂埃希菌偶而檢出并有潛在的致 病性。,第二節(jié) 埃希菌屬,③ 弗格森埃希菌； ④ 赫爾曼埃希

13、菌；⑤ 傷口埃希菌。 最近還發(fā)現(xiàn)稱為不脫胺／凝聚埃 希菌 G+Cmol％為 48～52。,二、臨床意義 ⑴ 1. 致病因素 ⑴ 侵襲力 K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗體和 補(bǔ)體的作用。菌毛能幫助細(xì)菌粘附于 粘膜表面稱定殖因子，能使細(xì)菌定殖 產(chǎn)生毒素而引起相應(yīng)的癥狀，直接侵

14、 犯粘膜引起炎癥。,⑵ 內(nèi)毒素 具有發(fā)熱、休克、DIC等病理作用。⑶ 腸毒素 產(chǎn)生不耐熱和耐熱腸毒素兩種腸 毒素：均可使腸道細(xì)胞中cAMP 的水平升高，引起腸液大量分泌 而導(dǎo)致腹瀉。,二、臨床意義 ⑵ 2. 所致疾病 ⑴ 腸道外感染 是臨床分離的G-桿菌中最常見的 菌種，可引起泌尿系等各種類型的感染。

15、 引起泌尿系感染的菌株以血清型01、 2、6為多見，本菌還可引起菌血癥、 膽囊炎、肺炎及新生兒腦膜炎等。 常 見于腹腔內(nèi)膿腫、腸穿孔繼發(fā)腹膜炎、 腸道手術(shù)后繼發(fā)感染或大面積灼傷創(chuàng)面 感染。,有時與類桿菌、糞腸球菌混合感染。產(chǎn) 生的膿液粘稠，有糞臭味。該菌對一般 抗生素敏感，易產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，而導(dǎo)致對第三代頭孢菌素耐藥。⑵ 腸道內(nèi)感染 其中有些菌株能

16、引起輕微腹瀉至霍亂 樣嚴(yán)重腹瀉，并能引起致死性并發(fā)癥如 溶血性尿毒綜合征。,(1) 腸毒素型大腸埃希菌(ETEC)： 引起兒童腹瀉和旅行者腹瀉，類似輕型 霍亂樣腹瀉。該菌產(chǎn)生耐熱腸毒素(ST) 和不耐熱腸毒素(LT)。(2) 腸致病性大腸埃希菌(EPEC)： 引起嬰幼兒腸道感染, 血清型是055、 0111等, 是嬰兒腹瀉的重要病原菌。(3) 腸侵襲型大腸埃希菌

17、(EIEC)： 類似于志賀菌，侵犯腸粘膜細(xì)胞，引起 菌痢樣癥狀，出現(xiàn)膿血粘液便。,引起腸道感染的大腸埃希菌,(4) 腸出血型大腸埃希菌(EHEC)，多為食 源性感染，通過糞-口途徑傳播。致病 因子是菌毛和Vero毒素，血清型是0157 ：H7，可引起出血性結(jié)腸炎，有2％～ 7％發(fā)展成溶血性尿毒綜合征，出現(xiàn)溶 血性貧血，血小板減少性紫癜和急性腎 衰竭，

18、死亡率為3％～10％。(5) 腸凝聚型大腸埃希菌(EaggEC)：代表 一群不產(chǎn)生LT或ST，不能用O：H血清 分型，可粘附于Hep-2細(xì)胞的菌株。與 世界各地慢性腹瀉有關(guān)。,三、微生物特性 1. 形態(tài)結(jié)構(gòu) G-直短桿狀， 大小為1.0～1.5μm， 多數(shù)有鞭毛能運動， 引起腸外感染的菌株有莢膜(微 莢膜)

19、和周身菌毛。,2. 抗原成分 ⑴ O抗原是多糖磷脂復(fù)合物(LPS)，耐 熱加熱100℃不能滅活，已有171種 是血清學(xué)分型的基礎(chǔ)。 ⑵ H抗原是不耐熱的蛋白質(zhì)，已知有56 種，均為單相菌株。 ⑶ K抗原是多糖莢膜抗原，對熱穩(wěn)定， 能阻止O凝集。血清型別按O：K：H 的順序以數(shù)字表示。,3. 培養(yǎng)特性 兼性厭氧，營養(yǎng)要

20、求不高，在普通 瓊脂上生長良好，形成圓形光滑、濕 潤的菌落，在選擇培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳 糖形成有色菌落。IMViC 試驗結(jié)果為 ++--。,四、微生物檢驗 (1) 腸道外感染標(biāo)本 1. 標(biāo)本采集 血液標(biāo)本以無菌操作技術(shù)采集靜脈血 5ml注入血液培養(yǎng)瓶。痰標(biāo)本取清晨口 腔清潔后從深部咳出的痰液。膿、分泌

21、 物等標(biāo)本用無菌棉拭子直接采取。 2. 直接涂片染色檢查 除血液標(biāo)本外，膿、痰、分泌物等標(biāo)本 均作涂片染色檢查。尿液和各種體液離 心后取沉淀物作涂片, 可見G-短桿菌。,3. 分離培養(yǎng)鑒定 (1) 血液標(biāo)本接種肉湯增菌培養(yǎng)，待生 長后移種血平板。體液標(biāo)本取離心 沉淀物接種于血平板。尿液標(biāo)本應(yīng) 同時作菌落計數(shù)

22、。膿、痰和分泌物 標(biāo)本可直接接種于血平板。35℃孵 育18～24h后觀察菌落形態(tài)。,(2) 鑒別培養(yǎng)基上挑選有色菌落，用生 化反應(yīng)、血清學(xué)試驗鑒定到屬和種。 典型的生化反應(yīng)特征： TSIA(雙糖鐵)產(chǎn)酸／產(chǎn)酸產(chǎn)氣， CIT(枸櫞酸鹽)陰性,URE(脲酶)陰性, IND(吲哚)陽性, MOT(動力)+／-, ORN(

23、鳥氨酸)+／-。,四、微生物檢驗(2) 腸道內(nèi)感染標(biāo)本 引起腹瀉的ETEC、EPEC 、EIEC和EHEC具有與腸道外感染的大腸埃希菌相似的生物學(xué)特性，但分別具有特殊的血清型、腸毒素或毒力因子。 檢驗程序同腸道外標(biāo)本。采集腹瀉 和食物中毒患者糞便和殘留食物，肛拭標(biāo)本，接種腸道選擇鑒別培養(yǎng)基分離培養(yǎng)和鑒定 。,腸道感染大腸埃希菌鑒定 1)

24、 ETEC 生化反應(yīng)、血清分型加腸毒素 測定：生化反應(yīng)符合大腸埃希菌，但血 清型別與致病沒有一定的聯(lián)系。主要依 賴ST和LT腸毒素的檢測。 2) EPEC 生化反應(yīng)加血清分型：用多價抗 血清檢測O抗原，進(jìn)行特異性抗血清的 凝集試驗，陽性的菌株測定凝集滴度以 排除交叉反應(yīng)，同時做H抗原測定 (O：H分型)。,3)EIEC 生化反應(yīng)、血清分型加腸毒

25、素測定：用O：H血清分型，賴氨酸脫羧酶陰性，無動力，常見的血清型0152和0124，與志賀菌相似，主要的鑒別試驗是醋酸鈉、葡萄糖銨利用試驗和粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗，大腸埃希菌三者均陽性，而志賀菌三者均陰性。4)EHEC 血清分型加生化反應(yīng)：應(yīng)常規(guī)作0157：H7的培養(yǎng)，必須經(jīng)生化反應(yīng)證實為大腸埃希菌。凡山梨醇陰性的大腸埃希菌0157：H7分離株無須再做毒素的檢測，因為均產(chǎn)生Vero毒素。5)EaggEC 用液體培養(yǎng)-凝集試驗，檢測細(xì)菌

26、對細(xì)胞的粘附性或用DNA探針技術(shù)。,可致多種感染，輕者為自愈性胃腸炎，重者可引起致死性傷寒。傷寒和副傷寒A、B引起胃腸炎、菌血癥和腸熱癥；豬霍亂沙門菌引起胃腸炎和敗血癥，兒童多見。,第三節(jié) 沙門菌,一、分 類 沙門菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌 屬。根據(jù)O抗原分群，再根據(jù)H抗原 分血清型，將沙門菌屬分為6個亞屬 (亞屬 1-6，其中亞屬3再分為3a和3b, 見表7

27、。8)，絕大多數(shù)(99％)沙門菌 的臨床分離株是亞群1中的菌種。本 屬細(xì)菌DNA G+C含量為50％-53％。,二、臨床意義 (一) 致病因素 1. 侵襲力 有Vi抗原的具有侵襲力，穿過小腸 上皮被吞噬后，由于Vi抗原的保護(hù), 反 而在細(xì)胞內(nèi)繁殖，并隨吞噬細(xì)胞至機(jī)體 其他部位，故稱細(xì)胞內(nèi)寄生菌。,2. 內(nèi)毒素

28、 有較強(qiáng)的內(nèi)毒素，可引起發(fā)熱，白 細(xì)胞改變，中毒性休克，并能激活 補(bǔ)體，導(dǎo)致一系列病理生理變化。3. 腸毒素 某些沙門菌(如鼠傷寒沙門菌)能產(chǎn) 生類似大腸埃希菌的腸毒素。,(二)所致疾病 1. 胃腸炎 最常見，引起腹瀉，伴有低熱，惡心 和嘔吐。 2. 菌血癥或敗血癥 以豬霍亂沙門菌感染為多，表現(xiàn)為高熱 寒戰(zhàn)。常伴有膽

29、囊炎、骨髓炎。血培養(yǎng) 陽性而便培養(yǎng)陰性。 3. 腸熱癥 由傷寒沙門菌引起。血培養(yǎng)或肥達(dá)反應(yīng) 陽性。經(jīng)口感染，穿過小腸上皮到達(dá)淋 巴結(jié)，進(jìn)入血流，第一次菌血癥。出現(xiàn) 發(fā)熱等癥狀。,隨血流播散至肝、脾等器官中繼續(xù)繁 殖，再次進(jìn)入血流擴(kuò)散，第二次菌血癥， 出現(xiàn)持續(xù)高熱、肝脾腫大、皮疹和全身中 毒癥狀。細(xì)菌隨膽汁進(jìn)入腸腔，經(jīng)糞便排 出。 潛

30、伏期7—20天，典型病程3-4周，發(fā)病 2周后機(jī)體出現(xiàn)免疫反應(yīng)，使疾病好轉(zhuǎn)， 但同時也引起遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致腸壁 淋巴結(jié)壞死潰瘍，可造成腸穿孔而危及生 命。4. 攜帶者 約3％患者成為攜帶者，糞便持續(xù)排菌達(dá) 1年以上。,三、微生物特性 1. 形態(tài)染色 G-桿菌細(xì)長，1.0～3.0μm, 有鞭毛， 無芽胞 和莢膜。 2. 抗原結(jié)構(gòu)有3種: ⑴

31、 O抗原為多糖·類脂·蛋白質(zhì)復(fù)合物，能耐 受100℃ 2.5 h。共有58種，是分群的依據(jù), 凡 含共同抗原的血清型歸為一個群，沙門菌含 一種或數(shù)種O抗原,每群以O(shè)加上數(shù)字及括號 大寫英文字母順序編排，如02群(A)，Z以后 直接加數(shù)字表示，如051群。刺激機(jī)體產(chǎn)生 IgM抗體, 與相應(yīng)抗血清反應(yīng)呈顆粒狀凝集。,⑵ H抗原 為蛋白

32、質(zhì)抗原，加熱被破壞。有兩個 相,第一相稱特異相，用a、b、c表示, 是定型的依據(jù)。刺激機(jī)體產(chǎn)生的IgG 抗體,與相應(yīng)的抗血清呈絮狀反應(yīng)。 ⑶ 表面抗原 為Vi抗原有保護(hù)作用?？勺柚筄抗原 與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，故在沙門菌血 清學(xué)鑒定時應(yīng)加以注意。,三、微生物特性 ⑵ 3. 培養(yǎng)特性 兼性厭氧，生長溫度35℃～37℃，最適 生長pH

33、為6.8～7.8;營養(yǎng)要求不高，在腸道 選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖形成透明菌 落，在SS瓊脂上形成黑色的菌落。 4. 抵抗力 不強(qiáng)，加熱60℃1h或65℃20min，在水 中能活2～3周，糞便中呵存活1～2個月 5. 變異性 有S-R變異、H-O變異和位相變異等具 有雙相H抗原菌變成單相菌 。,四、微生物檢驗 1. 采集標(biāo)本

34、 傷寒沙門菌發(fā)病第l周取血。第2、3 周取糞便、尿液做培養(yǎng)的分離率高。 2. 直接鏡檢 革蘭陰性桿菌。直接用膠乳凝集試驗 檢測病人標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物沙門菌抗 原，可快速診斷。,3. 分離培養(yǎng)與鑒定 常用腸道鑒別培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng) 基。在菌最較少時，血液和骨髓液 分離培養(yǎng)用增菌肉湯。35℃-37℃孵 育，選擇透明的可疑菌落做鑒定。,沙門菌的鑒定

35、1. 用生化試驗將可疑菌落鑒定到屬和種, 基本 生化反應(yīng)特征： TSIA(雙糖鐵) 產(chǎn)堿／產(chǎn)酸 或產(chǎn)堿／產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S陽性、CIT(枸櫞酸 鹽) 陽或陰性、URE (脲酶)陰性、IND(吲哚) 陰性、MOT(動力)陽性、VP陰性、ORN(鳥 氨酸)陽性。凡臨床分離菌乳糖、吲哚陽性， 或脲酶陽性者，均不考慮為沙門菌。,2. 血清學(xué)分型： 用抗血清對所分離菌種的O抗原、Vi

36、 抗原、第一、二相H抗原進(jìn)行凝集試 驗。先用多價O抗血清(A-F)進(jìn)行分群 ，95％以上都屬A-F群，對早期診斷 有重要意義。再分別用單價因子血清 定群，用H因子血清檢查H抗原。 綜合O、H及Vi因子血清的檢查結(jié) 果進(jìn)行判斷。,(五) 抗體檢測(肥達(dá)反應(yīng)) 用已知傷寒、副傷寒沙門菌的O、H 抗原，檢測受檢血清中有無相應(yīng)的抗體 的半定量試

37、管內(nèi)凝集試驗，稱為肥達(dá)反 應(yīng)。能輔助診斷傷寒，甲、乙、丙型副 傷寒沙門菌引起的腸熱癥。,1. 方法 將受檢血清用生理鹽水作倍比稀 釋，分別加入等量傷寒沙門菌O、H 抗原及副傷寒沙門菌甲、乙、丙的 H抗原，進(jìn)行試管內(nèi)凝集試驗，凡 血清最高稀釋度出現(xiàn)明顯凝集者為 凝集效價。,2. 結(jié)果解釋 (1) 正常值：各地區(qū)有所不同，O> 80×,

38、 H>1：160×，A、B，C>l：80×； 或第二份血清效價增高4倍以上具有 診斷意義。 (2) O抗原的抗體為IgM，出現(xiàn)較早，H 抗體為IgG，出現(xiàn)較遲。①O高H不高, 可能為疾病早期；—周后復(fù)查如升高 為腸熱癥。②H高O不高，可能以往 患過傷寒或接受過預(yù)防接種

39、，為回憶 反應(yīng)。,—、分 類 將志賀菌屬分為4個血清群(種)：A群為 痢疾志賀菌；B群為福氏志賀菌；C群為鮑 特志賀菌；D群為宋內(nèi)志賀菌。 最近將生化性狀相近的A、B，C群歸為 一群，統(tǒng)稱志賀菌A、B、C血清群；而將 生化特征與之相異，鳥氨酸脫羧酶和β-半 乳糖苷酶均陽性的宋內(nèi)志賀菌單列出來。 DNA G+Cmol％為49～53。,第四節(jié) 志賀

40、菌屬,二、臨床意義(一)致病因素 1. 侵襲力 因菌毛的作用，細(xì)菌粘附在腸粘膜表面; 2. 內(nèi)毒素 造成粘膜細(xì)胞死亡發(fā)炎，并形成毛細(xì)血 管血栓，導(dǎo)致壞死脫落和潰瘍，臨床出現(xiàn) 膿血便；并引起全身中毒癥狀，導(dǎo)致發(fā)熱 、意識障礙，甚至中毒性休克； 3. 外毒素 A群志賀菌Ⅰ和Ⅱ型產(chǎn)生志賀毒素，有 細(xì)胞毒、腸毒素和神經(jīng)毒等生物

41、學(xué)活性。,(二) 所致疾病 有以下3種臨床類型： 1．急性細(xì)菌性痢疾 表現(xiàn)為腹痛發(fā)熱，有里急后重現(xiàn)象, 便中含有粘液和血。很少進(jìn)血流，中毒 性菌痢見于小兒，常無消化道癥狀而表 現(xiàn)為全身中毒癥狀，往往造成死亡。,2. 慢性細(xì)菌性痢疾 菌痢治療不徹底，造成反復(fù)發(fā)作 遷延不愈，超過2個月視為慢性菌 ??；3. 攜帶者 有恢復(fù)期帶菌、

42、慢性帶菌和健康 帶菌等3種，是主要的傳染源。,三、微生物特性 1. G-桿菌，菌體短小，無芽胞莢膜和鞭 毛，有菌毛 2. 抗原成分 有群和型特異性兩種O抗原，是分類依 據(jù)根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原的不同，分為 A 、B、C、D 4個血清群和40余個血清型。 O抗原耐熱，加熱100℃、60min不被破壞。K抗原能阻斷O凝集。,3. 變異性 有S-R變

43、異、耐藥性變異。多重耐藥性 問題己成為嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)問題。4. 培養(yǎng)特性 兼性厭氧，生長溫度37℃，pH7.2～7.4 。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生 長。在鑒別培養(yǎng)基上形成無色半透明的 菌落。5. 抵抗力 比其他腸道細(xì)菌抵抗力低，在1％石炭酸 中15-30min和加熱60℃10min即被殺死,四、微生物檢驗 1. 標(biāo)本采集 在治療

44、前采集粘液膿血便作床邊 接種，不能及時接種可置甘油保存 液送檢; 2. 直接鏡檢 G-桿菌。膠乳凝集試驗和免疫熒 光技術(shù)檢測抗原。,3. 核酸檢測 志賀菌攜帶一個非結(jié)合型大質(zhì)粒, 能 編碼與侵襲性相關(guān)的外膜蛋白, 是產(chǎn) 生痢疾綜合征的重要致病因子, 從中 2.5kb侵襲相關(guān)區(qū)段中設(shè)計出ipaH引 物, 可用于檢測志賀菌序列。

45、4. 分離培養(yǎng) 用鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基,取可疑 菌落鑒定。,志賀菌鑒定（1） 1.生化試驗 鑒定到屬和種 基本生化反應(yīng)特征: TSIA(雙糖鐵)產(chǎn)堿／產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣, CIT(枸櫞酸鹽)陰性, URE(脲酶)陰性, MOT(動力) 陰性, YP陰性。,志賀菌鑒定（2）2. 血清學(xué)鑒定 先用志賀菌屬4種多價 (A群1，2型、B群 1～6型、C群l～6型及D群)作玻片凝集試 驗

46、，凝集者再進(jìn)一步作定型。 A群：即痢疾志賀菌，為一群甘露醇陰性 的菌株，共有10個血清型(1～)0)，其O抗 原從1～ X共10種．均為獨立的血清理，,Ｂ群：即福氏志賀菌，有6個血清型和X、Y 2個變型。6型菌株缺少共同的群抗原，故多價血清中應(yīng)包含6型因子血清，否則將會造成漏檢。 C群：即鮑特志賀菌。本菌共有15個血清群， D群：即宋內(nèi)志賀菌：僅有—個血清型，但有光滑型(S)和粗糙型

47、(R)兩種茵落; R型菌 不被S型血清所凝集；因此診斷血清應(yīng)含有S及R兩種因子血清,包括3種人類致病菌：鼠疫耶爾森菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和假結(jié)核耶爾森菌。還可從臨床標(biāo)本中分離到弗氏、中間、克氏、輿氏、伯氏、莫氏、羅氏和魯氏等8種耶爾森菌。,第五節(jié) 耶爾森菌屬,一、鼠疫耶爾森菌 (一) 臨床意義 是烈性自然疫源性傳染病鼠疫的 病原菌。 1．致病因素

48、 有內(nèi)毒素和鼠毒素兩種毒素。鼠 毒素與毒力有關(guān)，作用于心血管系 統(tǒng)，引起不可逆性休克與死亡，該 毒素存在于細(xì)胞內(nèi)，菌細(xì)胞裂解或 白溶后釋放。,2．臨床類型 1) 腺鼠疫：局部淋巴結(jié)(多為腹股溝淋 巴結(jié))的腫脹、壞死和膿腫； 2) 敗血型鼠疫：由細(xì)菌侵入血流大量 繁殖所致?？稍?-3天內(nèi)死亡； 3)

49、肺鼠疫：由腺鼠疫、敗血型鼠疫繼 發(fā)而成，可通過呼吸道在人與人之 間直接傳播，引起原發(fā)性肺鼠疫， 死亡率極高。,(二) 微生物特性 1. G-桿狀，0.5～1.0μm，兩極濃染， 有莢膜，無芽胞和鞭毛。 2. 抗原構(gòu)造構(gòu)造復(fù)雜，重要的有(1)F1 抗原:是封套抗原。特異性高，抗原 性強(qiáng)，產(chǎn)生的抗體有良好的保護(hù)作

50、 用; (2)V／W抗原：是菌體的表面 抗原，與本菌的毒力和侵襲力有關(guān)。 (3)T抗原：為為鼠毒素,有良好的抗 原性和免疫原性，可脫毒成類毒素 制成抗毒素。,3. 兼性厭氧，生長溫度為27℃～30℃，最 適pH為6.9～7.2, 血瓊脂培養(yǎng)48h后形成 粗糙菌落，肉湯培養(yǎng)48h后形成菌膜，稍 加搖動后的菌膜鐘乳石狀下垂；本菌動

51、 力為陰性；IMViC試驗反應(yīng)模式為—+ —、苯丙氨酸脫氨酶、脲酶、硫化氫 均為陰性；不液化明膠，當(dāng)穿刺培養(yǎng)時 菌沿穿刺線縱樹狀發(fā)育；分解葡萄糖產(chǎn) 酸不產(chǎn)氣，對多數(shù)糖不分解：,(三) 微生物檢驗 鼠疫耶爾森菌傳染性極強(qiáng)，故應(yīng)嚴(yán)格遵守操 作規(guī)程，一旦疑為本菌，應(yīng)立即向省市疾病控 制中心等部門報告，并將菌種送檢驗中心或?qū)?業(yè)實驗室作進(jìn)一步的鑒定。鼠疫的確

52、診主要依 賴病原學(xué)診斷，須經(jīng)全面生化反應(yīng)、噬菌體裂 解試驗和動物實驗才得以作出最終鑒定。診斷 確立后除對患者進(jìn)行隔離治療外，對疫區(qū)及有 關(guān)人員須采取有效的預(yù)防隔離措施，防止疫情 擴(kuò)散。,二、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 天然寄居在多種動物體內(nèi)，如豬、鼠 、家畜和兔等。通過污染食物(牛奶、豬 肉等)和水，經(jīng)糞—口途徑或因接觸染疫 動物而感染。本菌具有侵襲

53、性及腸毒素 為人獸共患病原菌,通過污染食物和水源 經(jīng)消化道傳播，或因接觸帶菌動物而感 染。臨床表現(xiàn)以小腸、結(jié)腸炎為多見,還 可引起結(jié)節(jié)性紅斑、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等自 身免疫性疾病。,(一) 微生物特性 1．G-球桿菌，偶有兩極濃染，無芽胞莢 膜，35℃無動力，22—25℃有動力。 2．根據(jù)O抗原可分為血清型，我國主要

54、 為O9、O8、O5、O3等幾種血清型與 致病性有關(guān)。3．培養(yǎng)特性 兼性厭氧, 耐低溫，在4℃～40℃均能生長，最適 溫度為20℃～28℃。在普通瓊脂上生 長良好。不發(fā)酵乳糖，能分解葡萄糖和 蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫陰性，脲酶陽 性，VP試驗22℃-25℃陽性，35℃-3

55、7℃ 陰性，鳥氨酸脫羧酶陽性。,(三) 微生物檢驗與鑒定 1. 采集糞便、食物，也取血液，尿液 等標(biāo)本。 2. 直接涂片鏡檢 G-球桿菌。 3. 冷增菌 糞便標(biāo)本可用7ml M／15 Ph7.4 PBS 4℃增菌2-3周。 4. 耶爾森菌專用選擇培養(yǎng)基(CIN)的 分離

56、, 培養(yǎng)48h后, 菌落為粉紅色。,生化反應(yīng)特征：TSIA(三糖鐵)產(chǎn)酸／ 產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，H2S陰性， CIT(枸櫞酸 鹽)陰性，URE(脲酶)陽性，PHE(苯丙氨 酸)陰性，OXI(氧化酶)陰性，IND(吲哚) 陰性／陽性，ORN(烏氨酸)陽性MOT(動 力)，V-P，β-半乳糖苷酶)等結(jié)果與培養(yǎng) 溫度有關(guān)(22℃-25℃陽性，35℃陰性)。5. 血清定型。,四、假結(jié)核耶爾森菌

57、鼠和鳥類是天然宿主，人類感染少 見。多數(shù)病例為腸道感染，有時可引 起腸系膜淋巴結(jié)炎，癥狀類似闌尾炎。 標(biāo)本接種選擇鑒別培養(yǎng)基, 孵育24h 后為無色(乳糖陰性)的小菌落;,生化反應(yīng)特征：TSIA(三糖鐵)產(chǎn)堿／產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣，H2S陰性，CIT(枸櫞酸鹽)陰性，URE(脲酶)陽性，PHE(苯丙氨酸)陰性，OXI(氧化陰性，V-P陰性，IND(吲哚)陰性，MOT(動力)22℃

58、-25℃陽性；35℃陰性；可與鼠疫耶爾森菌區(qū)別。,五、其他耶爾森菌 弗氏、中間、克氏、奧氏、伯氏 、莫氏、羅氏和魯氏耶爾森菌亦可 從腸道內(nèi)外標(biāo)本分離到，生化性狀 相似，均能在4℃以及在CIN上生長, 在冷凍食品中增殖，具有潛在的致 病性。,—、分 類 包括4個種：弗勞地拘櫞酸桿菌, 異型拘櫞酸桿菌, 無丙二酸

59、鹽枸櫞酸 桿菌和無丙二酸鹽拘櫞酸桿菌生物 群1群。,第六節(jié) 枸櫞酸桿菌屬,二、臨床意義 為條件致病菌，與腹瀉和腸道外感 染有關(guān)。 1. 異型枸櫞酸桿菌引起新生兒腦炎、 敗血癥； 2. 弗勞地枸櫞酸桿菌引起胃腸道感 染，也可致菌血癥及許多感染； 3. 無丙二酸鹽拘櫞酸

60、桿菌很少在腸 道外部位分離到；有時與G-無芽 胞厭氧菌(產(chǎn)黑色素類桿菌等)合 并感染。,三、微生物特性 1. 為G-桿菌，有動力(周身鞭毛)、無 芽孢、無莢膜。 2. 兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，能在普 通瓊脂上生長。在血平板形成邊緣 整齊，直徑2-4mm的不溶血

61、菌落。 在腸道選擇培養(yǎng)基上為乳糖發(fā)酵的 菌落。 3. 弗勞地枸櫞酸桿菌可產(chǎn)生硫化氫， 生化特性和抗原結(jié)構(gòu)與沙門菌屬 相似，應(yīng)注意鑒別。,四、微生物檢驗 1. 直接鏡檢 G-桿菌 ； 2. 分離培養(yǎng)與鑒定 取可疑菌落乳糖 發(fā)酵菌株產(chǎn)生綠色金屬光澤； SS上 菌落中央黑色，周圍

62、透明； 3. 將可疑菌落用生化、血清學(xué)試驗進(jìn) —步鑒定到屬和種。 符合腸桿菌科和拘櫞酸桿菌屬的基本 特性。,五、枸櫞酸桿菌屬鑒定 1. 屬的鑒別 生化反應(yīng)與沙門 菌屬(亞屬1和3)及愛德華菌 屬相似, 主要鑒別點是賴氨 酸脫羧酶陰性。,2.種間鑒別：弗勞地枸櫞酸桿菌大部分菌株吲哚陰性，硫化氫多數(shù)陽性(80％)而其

63、他幾個菌種相反，異型拘櫞酸桿菌的生化特征為丙二酸鹽和側(cè)金盞花醇陽性，無丙二酸鹽枸椽酸桿菌及生物l群之間的區(qū)別是后者棉子糖和蜜二糖陽性。,六、基本生化反應(yīng)特征 TSI(三糖鐵)產(chǎn)酸／產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)堿 ／產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生硫化氫，CIT(枸櫞 酸鹽)陽性，URE (脲酶)陰性／陽性， IND(吲哚)陽性／陰性，MOT(動力)陽 性，V-P陰性，ORN(烏氨酸)陽性／陰

64、 性，ARG(精氨酸)陽性，LYS(賴氨酸) 陰性。,一、分 類 克雷伯菌屬共有7個種：肺炎克雷 伯菌、產(chǎn)酸(催娩)克雷伯菌、解鳥氨 酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克 雷伯菌、鼻硬結(jié)克雷伯菌和土生克雷 伯菌。,第七節(jié) 克雷伯菌屬,二、臨床意義（1） 肺炎克雷伯菌 可引起典型的原發(fā)性肺炎；該菌

65、在 口咽帶菌率為1％—6％，住院病人中 高達(dá)20％，是酒精中毒者，糖尿病人 和慢性阻塞性肺部疾病患者并發(fā)肺部 感染的潛在危險因素。,也能引起肺外感染，包括腸炎和腦膜炎(嬰兒)，泌尿道感染(兒童和成人)及菌血癥：由該菌引起的免疫低下患者感染或醫(yī)院感染不斷增多，本菌對氨芐西林天然耐藥，對頭孢菌素、妥布霉素、阿米卡早和多粘菌素B等敏感，易產(chǎn)生對第三代頭孢菌素耐藥。,二、臨床意義（2） 本菌屬存在于

66、人和動物的胃腸道內(nèi), 將近半數(shù)的產(chǎn)酸克雷伯菌分離自糞便, 其次是血液：土生和植生克雷伯菌也 存在于自然界中，攜帶耐藥質(zhì)粒，能 引起多重耐藥菌感染。,臭鼻克雷伯菌經(jīng)常從萎縮性鼻炎和鼻粘膜的化膿性感染中分離到，亦有引起角膜潰瘍的報道，以及從血、尿和其他組織中分離出該菌的報告，致病范圍比以往所認(rèn)識的更為廣泛。 鼻硬結(jié)克雷伯菌引起呼吸道粘膜、口咽部 鼻和鼻旁竇的感染，導(dǎo)致肉芽腫性病變和硬結(jié)形成,

67、三、微生物特性 1. 形態(tài)結(jié)構(gòu) G-桿菌 無鞭毛無芽胞, 有明顯的莢膜。 2. 兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，形成較大 、凸起灰白色的粘液菌落，易發(fā)生融 合，用接種針沾取時可挑出長絲狀細(xì) 絲。發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸在MAC培養(yǎng)基形成 紅色的菌落，紅色可擴(kuò)散至菌落周圍 的培養(yǎng)中。,3. 基本生化反應(yīng)特征： TS

68、I(三糖鐵)產(chǎn) 酸／產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸／產(chǎn)酸，CIT(枸 櫞酸鹽)陽性，URE(脲酶)陽性／陰性, IND (吲哚)陰性，V-P陽性，MOT(動 力)陰性，ORN(鳥氨酸)陰性，丙二酸 鹽陽性，DNA酶陰性。,1. 標(biāo)本直接鏡檢G-桿菌, 有明顯的莢 膜。2. 標(biāo)本接種在血瓊脂或腸道選樣鑒別 培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)挑選粘稠的粉紅 色易融合的可疑菌落,進(jìn)一步鑒定到 屬和種。