小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素crh酶聯(lián)免疫分析

1、1小鼠小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)(CRH)酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)的含量。實驗原理：實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)水平。用純化的小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促腎

2、上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)，再與HRP標(biāo)記的CRH抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)濃度。試劑盒組成試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜

3、2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板14819628℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：45ngL0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標(biāo)試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存20倍濃縮洗滌液20ml1瓶30ml1瓶28℃保存樣本處理及要求樣本處

4、理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固1020分鐘，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦

5、脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)3好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判

6、定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。計算：計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。（此圖僅供參考）試劑盒性能