促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素及受體在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達(dá).pdf

1、嬰兒痙攣癥(IS)是以年齡依賴性為特征的一種癲癇綜合征，主要臨床特征為點(diǎn)頭樣痙攣發(fā)作，腦電圖呈高峰節(jié)律紊亂，且常伴智力發(fā)育低下，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。半個(gè)世紀(jì)以前發(fā)現(xiàn)用促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)治療嬰兒痙攣癥有效，至今仍是IS治療的首選藥物，但其作用機(jī)理尚未闡明。已發(fā)現(xiàn)IS患者腦脊液中ACTH和皮質(zhì)醇都低于正常對(duì)照，進(jìn)一步研究提示ACTH是通過(guò)抑制CRH在杏仁核中的表達(dá)發(fā)揮其抗癲癇作用。已有較多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CRH具有誘導(dǎo)癲癇作用，增

2、加未成熟腦的興奮性。因此，有學(xué)者認(rèn)為嬰兒痙攣癥是腦內(nèi)CRH過(guò)多引起，但至今仍缺乏對(duì)IS患者腦組織的直接研究依據(jù)。
　　CRH在大腦主要有兩個(gè)受體CRHR1和CRHR2，CRH對(duì)CRHR1的親和性比CRHR2高數(shù)倍，CRHR1是CRH發(fā)揮效應(yīng)的重要受體。CRHR1和CRHR2屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，與CRH結(jié)合后啟動(dòng)cAMP及IP3，進(jìn)一步激活細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶PKA和PKC等信號(hào)途徑發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。PKC與癲癇發(fā)作關(guān)系密切，激活大鼠海

3、馬神經(jīng)元PKC的電生理研究發(fā)現(xiàn)PKC與癲癇易感性有著重要的關(guān)系，參與癲癇的發(fā)生與維持機(jī)制。CRH、CRHR1及其下游信號(hào)在人IS致癇組織中的作用尚不清楚，本研究檢測(cè)CRH、CRHR1和CRHR2在IS患者致癇組織中的表達(dá)，進(jìn)一步分析下游PKC和PKA信號(hào)分子的變化，有助于了解其在嬰兒痙攣癥癲癇性痙攣發(fā)作中的作用。
　　我們選取了難治性嬰兒痙攣癥手術(shù)切除標(biāo)本17例以及6例尸檢對(duì)照作比較。利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)手術(shù)切除

4、標(biāo)本以及尸檢對(duì)照中CRH、CRHR1和CRHR2的mRNA的表達(dá)情況，并進(jìn)一步用Western blot和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CRH和CRHR1的蛋白表達(dá)情況及細(xì)胞定位。由于CRH信號(hào)通路涉及PKA和PKC，因此我們還研究了CRH信號(hào)通路中PKA和PKC在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達(dá)。通過(guò)上述研究，得到下面的結(jié)果:
　　一、CRH、CRHR1和CRHR2在嬰兒痙攣癥致癇組織和對(duì)照組織中的表達(dá)
　　1.利用Real-time P

5、CR，我們觀察到在mRNA水平，CRH和CRHR1在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達(dá)較對(duì)照組明顯上調(diào)，而CRHR2在嬰兒痙攣癥致癇組織的表達(dá)和對(duì)照組無(wú)明顯差異（結(jié)果未出示）。Westem Blot結(jié)果顯示在蛋白水平，CRH和CRHR1的表達(dá)和Real-time PCR的結(jié)果一致，CRH和CRHR1在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達(dá)較對(duì)照組明顯增高。我們進(jìn)一步分析CRHR1下游信號(hào)分子PKA和PKC，結(jié)果PKC在嬰兒痙攣癥致癇組織的表達(dá)較對(duì)照組明顯升

6、高，而PKA無(wú)明顯差異（結(jié)果未出示）。
　　2.免疫組化結(jié)果分析顯示CRH和CRHR1的免疫陽(yáng)性反應(yīng)在嬰兒痙攣癥致癇組織中明顯升高，CRH主要分布于神經(jīng)元，CRHR1主要分布于神經(jīng)元，在膠質(zhì)細(xì)胞也有表達(dá)。半定量免疫染色評(píng)分分析顯示CRH和CRHR1的免疫陽(yáng)性反應(yīng)評(píng)分明顯高于對(duì)照。免疫熒光雙標(biāo)顯示，CRH陽(yáng)性神經(jīng)元共表達(dá)NF200，GFAP陽(yáng)性膠質(zhì)細(xì)胞和HLA陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)CRH。CRHR1陽(yáng)性神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞分別