豬流行性腹瀉診斷方法的研究進(jìn)展

1、1豬流行性腹瀉診斷方法的研究進(jìn)展豬流行性腹瀉診斷方法的研究進(jìn)展甘振磊，湯德元?，李春燕，王彬，張曉杰，王鳳，劉志杰（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽550025）摘要：要：豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和食欲下降為主要特征。由于PED與豬傳染性胃腸炎（TGE）的流行特點(diǎn)、臨診癥狀和病理變化非常相似，故臨床確診較為困難。目前，對該病的診斷方法主要有流行病學(xué)診斷、臨床及病

2、理診斷、病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷等方法。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，以分子生物學(xué)診斷法的靈敏度高、特異性強(qiáng)而被人們所重視。筆者主要針對該病的診斷方法就近年來的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，為豬流行性腹瀉的診斷提供參考。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉；流行病學(xué)；病原及血清學(xué)；分子生物學(xué)；診斷方法豬流行性腹瀉（Pcineepidemicdiarrhea，PED）是由套式病毒目冠狀病毒科冠狀病毒屬的豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的豬的一

3、種高度接觸性腸道傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和食欲下降為主要特征的傳染病。本病有一定的季節(jié)性，多發(fā)生于冬季12月至第2年2月寒冬季節(jié)，但在夏季也可發(fā)生。PED在各年齡的豬均可感染，傳播迅速，仔豬死亡率高，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上由于PED與豬傳染性胃腸炎（TGE）的臨床癥狀極其相似，再加上PED經(jīng)常與其他腹瀉類疾病混合感染，所以僅憑臨床癥狀來確診PED較為困難，還需進(jìn)行實驗室診斷。本文主要針對豬的流行性腹瀉的流行病學(xué)診斷、

4、臨床及病理診斷、病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等進(jìn)行闡述，為該病的確診提供參考。1流行病學(xué)診斷流行病學(xué)診斷豬流行性腹瀉發(fā)病有一定的季節(jié)性，多發(fā)生于冬季12月至第2年2月寒冬季節(jié)，但在夏季也可發(fā)生。該病自1971年首次在英國暴發(fā)以來，相繼在比利時、德國、匈牙利、瑞士等許多歐洲國家也都暴發(fā)了PED。在1978年英國和比利資助項目：貴州省貴陽市2005年畜牧科技專項基金項目資助[編號：(2005)筑科農(nóng)字第411號]作者簡介：甘振磊（

5、1986），男，碩士研究生，主要從事動物傳染病病原分子病毒學(xué)的科研學(xué)習(xí)。通訊作者：湯德元（1964），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事動物傳染病病原分子生物學(xué)和中西獸醫(yī)結(jié)合的教學(xué)科研工作。Email:tdyuan@3聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)診斷技術(shù)因其快速、方便、特異性強(qiáng)、敏感和準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)已成為實驗室最常用的檢測方法。同時，病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷方法也有了很大的發(fā)展，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善，其診斷方法具備了簡單、快速、可重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)

6、用于實驗室診斷?，F(xiàn)就以上診斷方法分別敘述如下：3.1病原學(xué)診斷病原學(xué)診斷3.1.1病毒的分離與鑒定病毒的分離與鑒定通過采集仔豬空腸及腸內(nèi)容物或刮取空腸及腸內(nèi)容物在青霉素和鏈霉素PBS液中制成5倍懸液，然后通過離心取上清液經(jīng)220nm微孔濾膜過濾，將濾液接種于Vero細(xì)胞單層上，放在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4d，觀察細(xì)胞有無病變。有病變的細(xì)胞可見細(xì)胞面粗糙，顆粒增多，有多核細(xì)胞，細(xì)胞逐漸脫落；或?qū)V液感染試驗仔豬，觀察仔豬的病理變化和臨床癥

7、狀，進(jìn)行回歸動物試驗。如武三孝[2]將試驗仔豬分為A、B、C、D4組，A組是口服加雙抗的腸液（剪右耳做標(biāo)記）；B組口服未加雙抗腸液（剪左耳做標(biāo)記）；C組口服腸管磨碎物（剪雙耳做標(biāo)記）；D組作空白對照組?？诜┝棵拷M均為50mL和30mL各1頭，48h后觀察臨床癥狀?；貧w動物試驗可驗證所分離的病毒。3.1.2免疫電鏡法免疫電鏡法一般來說，電鏡法可以有效的作出病原的診斷，可以通過電鏡來觀察病毒的結(jié)構(gòu)、形態(tài)特征及立體構(gòu)型等特點(diǎn)。如將感染豬小腸

8、或病毒細(xì)胞培養(yǎng)物制成超薄切片在電鏡下觀察，則可從平面上觀察到病毒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，形態(tài)大小，復(fù)制方式等。由于TGEV與PEDV同屬冠狀病毒，形狀非常相似，在普通電鏡下無法區(qū)別，為此需要用免疫電鏡法（IEM）。IEM法既可用已知的PEDV高免血清檢測未知抗原，又可用已知的PEDV抗原檢測未知抗體。王繼科等[3]把抗原和抗體分別經(jīng)10000gmin離心，免疫復(fù)合物又經(jīng)12000gmin離心，最后在電鏡下直接觀察到典型的病毒粒子形成的免疫復(fù)合物，建