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1、第十章酶的作用機(jī)制和酶的調(diào)節(jié)第一節(jié)酶的活性部位一、酶活性部位的特點(diǎn)只是酶分子的一小部分;通過(guò)誘導(dǎo)契合形成與底物互補(bǔ)的特定三維結(jié)構(gòu);通過(guò)次級(jí)鍵與底物相互作用;有一定的柔性(鄒承魯?shù)膶?duì)比研究發(fā)現(xiàn)活性部位的柔性比其他部位更強(qiáng));包括底物結(jié)合基團(tuán)和催化基團(tuán),但二者的區(qū)分有時(shí)并不嚴(yán)格。二、研究酶活性部位的方法(一)側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾法非特異性共價(jià)修飾(作用于酶分子中某一基團(tuán)),酶活力喪失與修飾劑濃度成比例,底物或競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑可降低修飾作用。特異性
2、共價(jià)修飾(作用于特定酶的特定基團(tuán)),如二異丙基氟磷酸(DFP)只與胰凝乳蛋白酶活性部位的絲氨酸羥基結(jié)合;親和標(biāo)記試劑可以與活性部位的特定基團(tuán)共價(jià)定量結(jié)合,如對(duì)甲苯磺酰L苯丙氨酰氯甲基酮(TPCK)與胰凝乳蛋白酶活性部位絲氨酸羥基的結(jié)合。(二)動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定法(三)X射線晶體結(jié)構(gòu)分析法(四)定點(diǎn)誘變法第二節(jié)酶催化反應(yīng)的獨(dú)特性質(zhì)酵母醛縮酶的過(guò)渡態(tài)類似物與酶的親和力遠(yuǎn)大于其底物,說(shuō)明酶可以引起底物的形變。小牛小腸腺苷脫氨酶的過(guò)渡態(tài)類似物與酶的
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