細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)問題整理題庫(kù)

1、一名詞解釋1.細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)：用酶消化法講組織碎塊分離成單個(gè)細(xì)胞，用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，在體外適宜的條件下，使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。2.BSS溶液溶液：平衡鹽溶液，是人工合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分，也常用來洗滌組織細(xì)胞，其主要成分是無機(jī)鹽和葡萄糖，無機(jī)鹽構(gòu)成細(xì)胞的生命成分，維持細(xì)胞滲透壓既其生存環(huán)境的穩(wěn)定。葡萄糖供給細(xì)胞生存所需的能量。其中含少量酚紅作為溶液酸堿度的指示劑。Hank’s液是常用的BSS液。3.原代細(xì)胞

2、培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)：又稱為初代細(xì)胞培養(yǎng)，從機(jī)體去的材料（細(xì)胞、組織或器官），在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)到第一次傳代前。4.傳代培養(yǎng)或傳代傳代培養(yǎng)或傳代：細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中。5.組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)法：將組織塊剪切成小塊，直接送入培養(yǎng)瓶（皿）中，貼附一段時(shí)間后，細(xì)胞從組織塊長(zhǎng)出，最終形成單層細(xì)胞。6.細(xì)胞系細(xì)胞系：原代細(xì)胞首次傳代成功后即可成為細(xì)胞系7.細(xì)胞株細(xì)胞株：通過篩選或克隆化，且有特殊性質(zhì)或特異標(biāo)記的細(xì)

3、胞，這些特性在以后的培養(yǎng)中必須存在。這些特性包括：具有一定的標(biāo)記染色體，對(duì)某種病毒的敏感性或抗性，以及具有特殊的抗原性等。8.接觸抑制接觸抑制：當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞阻擋而無去處時(shí)就停止移動(dòng)，接觸區(qū)域的細(xì)胞膜皺褶樣活動(dòng)停止，這樣保證了細(xì)胞不會(huì)重疊生長(zhǎng)。9.密度抑制密度抑制：正常細(xì)胞生長(zhǎng)匯合成單層時(shí)，細(xì)胞密度達(dá)到一定程度時(shí)，細(xì)胞即停止分裂的現(xiàn)象。10.合成培養(yǎng)基（syntheticmedium）是通過順序加入準(zhǔn)確稱量的高純度化學(xué)試劑與蒸餾水

4、配制而成的，其所含的成分（包括微量元素在內(nèi)）以及他們的量都是確切可知的。合成培養(yǎng)基一般用于實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的營(yíng)養(yǎng)、代謝、遺傳、鑒定和生物測(cè)定等定量要求較高的研究11.有絲分裂指數(shù)：mitoticindex一個(gè)細(xì)胞群體中正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。12.懸浮培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)：在流動(dòng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)非貼壁的懸浮細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞或組織的培養(yǎng)方法。細(xì)胞附著在微運(yùn)載體上的培養(yǎng)也是一種懸浮培養(yǎng)。二、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn)：1.得到的是活細(xì)胞：

5、能長(zhǎng)時(shí)間、直接觀察、研究活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)2.可控制：選擇對(duì)象、性質(zhì)、調(diào)節(jié)條件。3.應(yīng)用廣，學(xué)科多：對(duì)象廣。各種動(dòng)物：低等動(dòng)物高等動(dòng)物人類一種動(dòng)物：不同年齡不同組織:正常或異常（腫瘤）4.較經(jīng)濟(jì)：花錢較少但可得到大量、同時(shí)、重復(fù)性好的生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象5.不易污染環(huán)境缺點(diǎn)：1.現(xiàn)人工無法完全模擬體內(nèi)環(huán)境a.失去彼鄰關(guān)系b.失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞相互間的影響2.細(xì)胞趨向單一化3.失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)4.分化減弱或不顯

6、要正確認(rèn)識(shí)體外培養(yǎng)細(xì)胞是一種特定條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞群體。5.某些類型細(xì)胞還很難培養(yǎng)十、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用？1、基本生長(zhǎng)特點(diǎn)、活動(dòng)及細(xì)胞周期2、細(xì)胞遺傳學(xué)3、細(xì)胞內(nèi)蛋白、酶及其它物質(zhì)的定性、定量分析（細(xì)胞化學(xué)、免疫組化和熒光定量等）4、分子生物學(xué)a.DNA分離、分析b.基因?qū)隿.基因表達(dá)的原位檢測(cè)5、生物技術(shù)a.疫苗的制備b.細(xì)胞工程抗體6、藥物開發(fā)藥理、毒力和藥效試驗(yàn)7、細(xì)胞分化如干細(xì)胞研究8、腫瘤學(xué)研究發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)化等9

7、、細(xì)胞衰老、凋亡2、乳鼠心肺組織塊原代培養(yǎng)的方法、乳鼠心肺組織塊原代培養(yǎng)的方法1)取材：將乳鼠斷髓——用鑷子夾尾，將鼠身浸入75%酒精中旋轉(zhuǎn)3s——取出后，置小鼠于培養(yǎng)皿中（已消毒）——固定小鼠于操作臺(tái)——用安爾碘消毒胸廓部位皮膚——在胸部中線處用2把鑷子撕開小鼠胸部皮膚——剪開胸腔，去除胸骨——用彎頭鑷子取出小鼠心肺組織——置于已加入Hanks液的青霉素瓶2）漂洗：用Hanks液沖洗小鼠心肺組織2次3）剪切：置組織塊于青霉素瓶一角，眼

8、科剪用力反復(fù)剪切組織2分鐘4）制備：用膠頭吸管轉(zhuǎn)移并涂布組織于25ml培養(yǎng)瓶——加全培養(yǎng)液于對(duì)面——2小時(shí)后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶3、培養(yǎng)細(xì)胞的分型、培養(yǎng)細(xì)胞的分型細(xì)胞類型根據(jù)是否附于支持物上生長(zhǎng)的特性，分為貼壁依賴性細(xì)胞（包括大多數(shù)動(dòng)物非淋巴組織細(xì)胞核許多異倍體腫瘤細(xì)胞）、非貼壁依賴性細(xì)胞（來源于血液淋巴組織的細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、某些腫瘤細(xì)胞核轉(zhuǎn)化細(xì)胞）。貼附型細(xì)胞貼附在支持物表面生長(zhǎng)，只依賴貼附才能生長(zhǎng)的細(xì)胞叫做貼附型細(xì)胞(Anchragedep

9、endentcells)這種現(xiàn)象與細(xì)胞分化有關(guān)。只能貼附在帶適量正電荷的固體或半固體表面上生長(zhǎng)。貼附型細(xì)胞的分型貼附型細(xì)胞的分型1.成纖維型細(xì)胞成纖維型細(xì)胞：(fibroblast)來自中胚層特點(diǎn)：與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形態(tài)相似胞體梭型、扇形或星形中央有圓形核胞質(zhì)向外伸出2～3個(gè)長(zhǎng)短不同的突起。細(xì)胞在生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀漩渦或火焰狀走行。起源：細(xì)胞來自中胚層間充質(zhì)組織。除真正的成纖維細(xì)胞、心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞。注意：細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)成為